[發明專利]尖吻蝮蛇凝血酶及其分離方法有效
| 申請號： | 201210167568.3 | 申請日： | 2012-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN102757948A | 公開（公告）日： | 2012-10-31 |
| 發明（設計）人： | 徐丹 | 申請（專利權）人： | 廣東瑞昇藥業有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/74 | 分類號： | C12N9/74;A61K38/48;A61P7/04 |
| 代理公司： | 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228 | 代理人： | 劉媖 |
| 地址： | 528437 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蝮蛇 凝血酶 及其 分離 方法 | ||
1.制備尖吻蝮蛇凝血酶的方法，其包括：
（1）將尖吻蝮蛇蛇毒溶液上樣于分子篩凝膠層析柱，用pH6.5~7.8的緩沖液洗脫，收集具有最強凝血酶活性的峰的洗脫液；
（2）將步驟（1）獲得的洗脫液上樣于陰離子交換層析柱，以含0-0.1M?NaCl的pH?7.2-8.2的緩沖液洗脫，收集具有最強凝血酶活性的峰的洗脫液；和
（3）將步驟（2）獲得的洗脫液上樣于分子篩凝膠層析柱，用水洗脫，收集具有最大峰面積的峰的洗脫液，任選將其進一步冷凍干燥。
2.權利要求1所述的方法，其中步驟（1）中，分子篩凝膠層析柱是Sephadex?G-75層析柱；緩沖液的pH值是7.0~7.5，優選是7.2；和/或，緩沖液是PBS緩沖液。
3.權利要求1所述的方法，其中步驟（2）中，陰離子交換層析柱是DEAE-Sepharose?Fast?Flow層析柱；緩沖液的pH值是7.5~8.0，優選是7.8；和/或，緩沖液是PBS緩沖液。
4.權利要求1所述的方法，其中步驟（3）中，分子篩凝膠層析柱是Sephadex?G-75層析柱。
5.權利要求1所述的方法，其中步驟（1）中洗脫的流速慢于步驟（3）中洗脫的流速。
6.權利要求1所述的方法，其中尖吻蝮蛇凝血酶的純度大于95%，優選大于96，%，更優選大于97%，如大于97.5%。
7.權利要求1所述的方法，其中尖吻蝮蛇凝血酶包含氨基酸序列分別如SEQ?ID?No：1和2所示的兩個亞基。
8.尖吻蝮蛇凝血酶，其包含氨基酸序列分別如SEQ?ID?No：1和2所示的兩個亞基，優選其是由權利要求1~7所述的方法制備的。
9.用于止血的藥物組合物，其包括權利要求8所述的尖吻蝮蛇凝血酶和藥學上可接受的載體。
10.權利要求8所述的尖吻蝮蛇凝血酶在制備用于止血的藥物中的應用。
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