[發明專利]一種抑制雞肌肉生成抑制素基因表達的siRNA及其應用

有效

• 申請號: 201210160720.5
• 申請日: 2009-10-13
• 公開（公告）號: CN102703449A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 楊寧;孫研研;蔣斌;鄭江霞;陳思睿
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/88;A01K67/027
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本申請是申請號為200910235403.3、申請日為2009年10月13日、發明名稱為“抑制雞肌肉生成抑制素基因表達的siRNA及其應用”的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及一種抑制雞肌肉生成抑制素基因表達的siRNA及其應用。

背景技術

2006年我國禽肉產量1506.6萬噸，僅次于美國，位居世界第二，比1985年增長了6.5倍，而同期世界禽肉產量只增長了1.4倍。據FAO統計，我國肉雞屠宰量從1990年的21.29億只增加到2006年的76.95億只，凈增加55.66億只。雞肉產量從1990年的266.32萬噸增加到2006年的1070.1萬噸，凈增加803.78萬噸。目前我國禽肉產量占肉類總量的18.7%，人均占有量1.5千克，同比世界禽肉產量比例30.3%還有很大的上升空間。

白羽肉雞是快大型商品化選育的雞種，具有生長快，產肉多的特點，但肉質較差。地方優質雞品種肉質鮮嫩，風味佳，但是生長緩慢，產肉較少。二戰以后，快大型白羽肉雞的育種進展很快，與1957年相比，快大肉雞達到上市體重的時間縮短了69天，目前只需32天即可上市。優質雞在我國有豐富的種質資源，粗略統計約有100多個地方雞種，如三黃雞，麻雞，狼山雞，油雞等。這些雞肉質鮮嫩，色香味美，其中烏雞還具有很高的藥用價值。優質雞種長期作為我國肉雞生產的特色產業，具有廣闊的市場空間，深受消費者歡迎。雖然價格相較于快大型白羽肉雞要貴一倍甚至更多，但是其需求量仍在不斷增長。國外知名的肉雞育種公司也一直在覬覦這個龐大市場。但是優質雞的育種進展緩慢，達到1.5Kg時日齡不少于50天。目前優質雞育種工作遵循世代傳遞清晰的傳統育種方法，父系、母系均采用一年一個世代的育種方案，憑經驗選取質量性狀，建立育種群進行世代雜交來選育。這樣不僅世代間隔長，選擇強度低，并且產肉量和肉質性狀與其它質量性狀雜交亂配，導致育種效率低下，遺傳進展緩慢。因此目前亟需加快我國優質雞育種技術體系創新。國家對此也相當重視，自從1980年國家科委設立優質黃羽肉雞選育計劃以來，其后每個五年計劃都有涉及優質雞育種攻關計劃，以期提高優質肉雞的產肉量和肉品質。

1998年Fire等將雙鏈RNA（dsRNA）注入線蟲體內，相關基因的表達被特異性的抑制，產生了與基因敲除一樣的缺陷型。他們把這種基因轉錄后卻被抑制表達的現象叫做RNAi（RNA?interference）。其機制是生物細胞內的長雙鏈RNA（double-stranded?RNA，dsRNA）被Dicer酶結合并切成長度為21-23bp的小干擾RNA分子（small?interfering?RNA，siRNA）。siRNA識別并結合靶基因轉錄后的mRNA上的同源序列，引導RNA誘導沉默復合物（RNA-induced?silencing?complex，RISC）將mRNA降解，導致轉錄后的基因沉默(posttranscriptional?gene?silencing，PTGS)。近年來的研究發現，RNAi現象廣泛存在于動植物體內。除了siRNA以外，具有莖環結構的短發夾RNA（short?hairpin?RNA，shRNA）在細胞內經過加工后也可以變成siRNA，并誘導RNA干擾，而且作用時間更為持久。這樣使得針對一些具有潛在利用價值的基因構建shRNA表達載體，并導入生物體內，特異性的對靶基因表達進行干擾，從而使動植物相關基因的表達被長期沉默成為可能。也預示著動植物在醫學醫藥，生物科技和畜牧業生產中潛在的巨大實用價值。

肌肉生成抑制素基因（Myostatin，MSTN)是1997年McPherron等從小鼠骨骼肌cDNA文庫中篩選出的一種負性調控骨骼肌生長的基因。

發明內容

本發明的目的是提供一種抑制雞肌肉生成抑制素基因表達的siRNA及其應用。

本發明提供的作用于肌肉生成抑制素基因的小干擾RNA，為如下a)或b)或c)：

a)由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA；

b)由序列表的序列3和序列表的序列4所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA；

c)由序列表的序列5和序列表的序列6所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA。

本發明還保護以上任一所述小干擾RNA在抑制細胞的肌肉生成抑制素基因表達中的應用。

所述肌肉生成抑制素基因可為GenBank?Accession?Number:NM_001001461自5’末端第1至1128位核苷酸。

所述細胞具體可為雞胚成肌細胞。