[發(fā)明專利]一種利用山藥帶腋芽莖段組織培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210158588.4
• 申請日: 2012-05-22
• 公開（公告）號: CN102657092A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓曉勇;殷劍美;張培通;彭琦;郭文琦;張恒友
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明“一種利用山藥帶腋芽莖段組織培養(yǎng)的方法”，是由山藥帶腋芽莖段外植體經(jīng)組織培養(yǎng)獲得試管苗，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

山藥（Dioscorea?Opposita?Thunb.），為薯蕷科薯蕷屬多年生草質(zhì)纏繞性藤本植物，我國南北各地均有種植。因其具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，是我國地道的藥材和傳統(tǒng)出口商品，其產(chǎn)品暢銷東南亞和日本等國。由于長期進(jìn)行營養(yǎng)繁殖,?不僅用種量大、擴(kuò)繁速度慢,?還因連續(xù)種植使病毒不斷積累導(dǎo)致種性退化，使其種植面積逐年下降，嚴(yán)重影響了質(zhì)量和產(chǎn)量的提高。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立山藥離體再生體系,?不僅可以加快山藥種苗繁殖速度，提高其繁殖效率，而且可顯著改善其品質(zhì)，提高其產(chǎn)量。山藥組織培養(yǎng)的研究國內(nèi)外均有報道，但多以莖段、零余子等誘導(dǎo)愈傷組織為研究內(nèi)容，不利于保持品種的穩(wěn)定性。離體條件下利用山藥帶腋芽莖段誘導(dǎo)獲得試管苗，可明顯提高繁殖系數(shù)和繁殖速度。它不僅具有繁殖率高和利于誘導(dǎo)形成零余子（另申請專利）的特點，而且利于保持本品種的優(yōu)良特性。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題??

本發(fā)明的目的是找到既能提高山藥種薯繁殖系數(shù)和繁殖速度，又能保持品種穩(wěn)定性的方法，此方法具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、繁殖效率高，種苗病毒少、遺傳穩(wěn)定性好且不受環(huán)境條件的影響等優(yōu)點，可以彌補現(xiàn)有山藥薯塊繁殖系數(shù)低、愈傷組織誘導(dǎo)組培苗繁瑣、時間長、效率低的不足，從而為山藥種薯擴(kuò)繁提供一種新的方法。

技術(shù)方案

一種利用山藥帶腋芽莖段組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

（1）材料處理：將山藥的塊莖淺埋在細(xì)沙中，栽培在恒溫（25℃）培養(yǎng)室中，長出幼苗時待用。

（2）外植體的滅菌：取鐵棍山藥的嫩莖，去掉葉片，用剪刀截成2-3cm帶腋芽的莖段，流動水沖洗10min左右。在超凈臺上用75%酒精浸泡30s，用NaClO滅菌20min，無菌水漂洗5-7次，用解剖刀切去末端留下約1.5-2cm左右的莖段接種在MS培養(yǎng)基中。

（3）芽的誘導(dǎo)分化：外植體經(jīng)滅菌后接種6-BA0.5-1mg·l^-1，NAA0-0.1mg濃度的MS培養(yǎng)基中。

（4）繼代增殖：誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌發(fā)出的不定芽長到帶兩片和兩片以上葉片的時候，切取單芽接種在6-BA?1.5mg·l^-1，NAA?0mg·l^-1濃度的MS培養(yǎng)基中。

（5）生根培養(yǎng)：將高2.0?cm以上、帶有2片或兩片以上葉的健壯小苗切下,?轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基成分為6-BA1.0mg·l^-1，NAA0.2mg·l^-1，活性炭0.02%濃度的MS培養(yǎng)基中。

（6）培養(yǎng)條件：培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照強度1200-1500lx，每天光照12h/d。培養(yǎng)基中瓊脂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7g/L，蔗糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30g/L。

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有益效果??

本發(fā)明能夠由帶腋芽莖段外植體誘導(dǎo)獲得山藥組培苗，從而可以室內(nèi)大量繁殖試管苗，實現(xiàn)山藥種薯繁殖工廠化生產(chǎn)。此方法包括幾個階段培養(yǎng)基成分以及處理方法，僅20天左右就可以獲得完整組培苗。

本發(fā)明具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、繁殖效率高，種苗病毒少、遺傳穩(wěn)定性好且不受環(huán)境條件的影響的特點。

日本白、無架山藥等品種，利用帶腋芽莖段按本發(fā)明進(jìn)行組織培養(yǎng)，均可得到完整組培苗。其中日本白的增殖倍數(shù)為2.5，無架山藥為1.5。

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附圖說明

圖1帶腋芽莖段。

圖2叢生芽。

圖3?繼代培養(yǎng)

圖4?生根培養(yǎng)。

圖5?組培苗。

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具體實施方式

下面通過基于帶腋芽莖段外植體誘導(dǎo)獲得山藥組培苗實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。

1?材料處理

將來源于河南溫縣的鐵棍山藥的塊莖淺埋在細(xì)沙中，栽培在恒溫（25℃）培養(yǎng)室中，長出幼苗時待用。

2?培養(yǎng)基滅菌及培養(yǎng)條件

高壓滅菌前調(diào)整培養(yǎng)基pH值為5.8，保持121℃滅菌20min。培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照強度1200-1500lx，每天光照12h。培養(yǎng)基中瓊脂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7g/L，蔗糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30g/L。

3?外植體的滅菌試驗

3.1?試驗設(shè)計