[發明專利]制備恩拉霉素A和B鹽酸鹽混合物的方法

有效

• 申請號: 201210153458.1
• 申請日: 2012-05-15
• 公開（公告）號: CN103421089A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 李繼安;陳代杰;陳舟舟;尚秀婷;鐘京諭;藍鴻;闞士東
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/16
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳長會;謝燕軍

技術領域

本發明屬于制藥工程領域，具體涉及一種制備恩拉霉素A和B鹽酸鹽混合物的方法。?

背景技術

恩拉霉素(英文名Enramycin或Enduracidin)，又名恩來霉素、安來霉素、持久霉素，是一種廣譜、高效、安全的新型飼料添加劑。其對革蘭氏陽性菌，尤其對產生氣莢膜梭菌有特效，且具有優良的促生長和改善飼料利用率的作用，被世界上許多國家推薦作為動物用抗生素促生長劑。其是由放線菌Streptomyces?fungicidious?NO.B5477發酵產生的一種多肽類抗生素。恩拉霉素是由包括13個不同種類的17個氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的有機堿。據其末端脂肪酸種類不同，可分為恩拉霉素A(Enramycin?A，分子式：C₁₀₇H₁₃₈Cl₂N₂₆O₃₁)和恩拉霉素B(Enramycin?B，分子式：C₁₀₈H₁₄₀Cl₂N₂₆O₃₁)，結構式如下。?

市場上主要來源是先靈葆雅公司的菌絲體預混劑。?

目前恩拉霉素預混劑作為獸用促生長劑使用，都是以混合物使用，主要活性成分是A，發酵液中A和B以一定的比例生成(大約為7∶1)，混合物的純度是指A和B的總純度。?

中國授權專利CN?101597578B用安伯萊特XAD-4和XAD-16等大孔吸附樹脂并結合溶劑、鹽酸和氯化鈉梯度洗脫來分離提取恩拉霉素；但其溶劑使用量高，步驟繁瑣，獲得的純度未知，且樹脂價格較高，對于大規模生產有限制作用。另中國發明專利申請201010213986.2用大孔弱酸性陽離子樹脂分離提取恩拉霉素；但弱酸性樹脂再生繁瑣，且其同樣使用了大量溶劑。?

因此本領域需要尋找更加簡單、綠色環保和低成本的恩拉霉素制備工藝。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種簡單、低成本的制備恩拉霉素A和B混合物的方法。該方法可以直接用于大規模生產，具有很好的商業價值。本發明可以將恩拉霉素A和B鹽酸鹽混合物的純度控制在92％以上，收率60％以上。?

因此，本發明的目的是提供一種制備恩拉霉素A和B鹽酸鹽混合物的方法，所述方法包括以下步驟：?

1)分離含有恩拉霉素A和B的發酵液，獲得菌絲體；?

2)使pH調節至2.0-4.5的抽提液與菌絲體混合，超聲破碎1-3h，然后攪拌12-24h，獲得混懸液，其中所述抽提液的pH用鹽酸調節；?

3)充分靜置2)步驟獲得的混懸液，過濾獲得含有恩拉霉素A和B鹽酸鹽的粗提液；?

4)將步驟3)獲得的粗提液在30-40℃下減壓真空濃縮，濃縮至原體積的1/10-1/20，獲得濃縮液；?

5)將步驟4)獲得的濃縮液的pH調節至8.0-9.0，并使恩拉霉素A和B鹽酸鹽溶解，過濾，獲得上柱母液；?

6)將步驟5)獲得的母液上大孔吸附樹脂柱，獲得含恩拉霉素A和?B鹽酸鹽混合物的收集液；?

7)將步驟6)獲得的收集液減壓真空濃縮到原體積的1/50-1/100，并凍干，獲得恩拉霉素A和B鹽酸鹽混合物。?

步驟1)的發酵液中恩拉霉素A和B的含量比例范圍約為4∶1-8∶1左右。?

另將柱層析后獲得的收集液中恩拉霉素A和B鹽酸鹽HPLC總純度88.0％以上的液體合并進行減壓真空濃縮。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟1)中，所述分離為過濾或離心。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟2)中，所述抽提液為有機溶劑的水溶液。?

根據本發明一個優選的實施方式，所述有機溶劑選自甲醇、乙醇或丙酮。?

根據本發明一個優選的實施方式，所述有機溶劑的體積百分比為50％-84％，優選64％-80％。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟2)中，用鹽酸調節所述抽提液的pH。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟2)中，所述抽提液的pH為3.0-3.5。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟5)中，用氫氧化鈉調節獲得的濃縮液的pH。?

根據本發明一個優選的實施方式，步驟5)中，用少量高濃度的甲醇、乙醇、異丙醇、二甲亞砜或丙酮與濃縮液混合使恩拉霉素A和B鹽酸鹽充分溶解。?