[發明專利]一種單一聚合度殼寡糖制備方法

有效

• 申請號: 201210146042.7
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102653569A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 李鵬程;李克成;邢榮娥;劉松;于華華;秦玉坤;李榮鋒;孟祥濤;李冰
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;C07H5/06;C07H1/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于海洋化學工程技術，具體涉及一種高純單一聚合度殼寡糖制備方法。

背景技術

殼聚糖是一個天然的線性多糖，由氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖通過β-1,4糖苷鍵連接而成。由于殼聚糖來源豐富，且安全無毒具有良好的生物兼容性，與人體細胞有良好的相容性，在食品醫藥，農業，材料科學領域具有很大的應用潛力。殼寡糖，又稱低聚葡萄糖胺、低聚氨基葡萄糖，是殼聚糖的降解產物。與殼聚糖相比，低分子量的殼寡糖水溶性大大提高，這有利于生物體吸收和利用。殼寡糖是目前僅知的唯一天然堿性寡糖，被發現具有多種生理活性，如抗腫瘤，抗菌，抗炎，抗氧化，調節血糖血脂，增強免疫力，活化腸道菌群等。殼寡糖顯示了比殼聚糖更優越的生物活性，而這些活性作用產生的機理研究，將對人類及動植物的健康發展具有積極的推動作用。

目前，殼寡糖主要通過殼聚糖的酸解，氧化降解，或酶解三種技術得到。然而，這些技術制備的殼寡糖產物是一個非常復雜的混合物，其中含有各個分子量各種脫乙酰度的殼寡糖。而大部分殼寡糖的生物活性都是采用這些混合物進行實驗，這很難知道具體是哪個或哪些殼寡糖分子在生物活性試驗中起作用。因此，為了進一步研究殼寡糖的生物活性，從殼寡糖混合物中分離得到帶有準確脫乙酰度和窄聚合度的殼寡糖是十分必要的。然而當前的分離技術對于單一聚合度殼寡糖的分辨率是低的，尤其對于聚合度4以上的殼寡糖分離還是非常困難的，而一般認為殼寡糖的生物活性要求其聚合度至少要大于4。單一聚合度的殼寡糖的分離技術對于殼寡糖的活性篩選及進一步在食品醫藥中的應用具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種單一聚合度殼寡糖的制備方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種單一聚合度殼寡糖的制備方法，將全脫乙?；瘹す烟侨芙膺^濾后用離子交換色譜柱CM?Sephadex?C-25以0-3M濃度的NaCl溶液在2-5mL/min-1的流速下進行分離純化，收集240-360min、360-460min、460-560min、560-640min、640-720min、720-780min、780-840min的洗脫液，將所得洗脫液分別經活性碳萃取脫鹽后濃縮，即得到單一聚合度全脫乙酰化殼寡糖。

所述單一聚合度全脫乙?；瘹す烟菫槭絀所示，

式I中n=2,3,4,5,6,7或8。

所述全脫乙?；瘹す烟菫閷ぞ厶墙浰峤到猓釢舛葹?-12mol/L，降解后采用醇將其沉淀，沉淀后離心，上清液濃縮后待用。

所述全脫乙?；瘹す烟菫槊撘阴６却笥?0％的殼聚糖中加入酸，在60-80℃下降解2-6h；降解后加入乙醇進行沉淀，沉淀后以4000g離心15min，收集上清濃縮后冷凍干燥得全脫乙?；瘹す烟牵?；其中乙酰度大于80％的殼聚糖與酸的質量體積比為1：10-100。

所述降解后加入乙醇，使降解液中乙醇最終濃度為60-90％（體積分數）。將所述全脫乙酰化殼寡糖于pH=3-6的酸性溶液中溶解，而后并用孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾，待用。

本發明的優點

1.本發明采用離子交換色譜分離得到高純度的單一聚合度系列殼寡糖（二糖至八糖），具有流速快、分辨率高、產率高的特點，而且分離步驟少，只經過一步分離就能夠得到純的單一聚合度殼寡糖。

2.采用本發明方法得到的殼寡糖利用HPLC檢測其純度，其中全脫乙酰化殼二糖至殼六糖純度大于98％，全脫乙酰化殼七糖純度大于92％，全脫乙?；瘹ぐ颂羌兌却笥?5％。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的離子交換色譜制備單一聚合度殼寡糖的的洗脫層析圖。

圖2A、B、C、D、E、F、G為本發明實施例提供的分離到的單一聚合度殼寡糖的高效液相分析譜圖。

圖3A、B、C、D、E、F為本發明實施例提供的分離到的單一聚合度殼寡糖的質譜分析圖譜。

具體實施例

實施例1

將1g高脫乙酰度（90％）的殼聚糖置于三口瓶中，加入6mol/L鹽酸降解殼聚糖制備全脫乙?；臍す烟侨芤?。加入鹽酸的體積與殼聚糖質量比為50:1，在70℃下降解5h。

反應后離心去除不溶物，上清液進行濃縮，并加入乙醇進行沉淀。使上清液中乙醇最終濃度為70％（體積分數）而后以4000g離心15min，收集上清濃縮后冷凍干燥得全脫乙?；瘹す烟菢悠?。