[發(fā)明專利]一種提高苯系物細(xì)胞傳感器檢測(cè)效果的固定化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210144409.1
• 申請(qǐng)日: 2012-05-09
• 公開（公告）號(hào): CN103387973A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊國(guó)強(qiáng);唐闊;馬安周;莊緒亮;白志輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10;G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用海藻酸鈣固定化處理提高苯系物細(xì)胞傳感器熒光假單胞菌(pseudomonas?fluorescens)A506(pTS)檢測(cè)效果的方法，其特征在于，通過(guò)固定化處理，提高了細(xì)胞傳感

器單位體積熒光信號(hào)和單個(gè)細(xì)胞熒光信號(hào)強(qiáng)度；具體步驟如下：

(1)細(xì)胞傳感器準(zhǔn)備：細(xì)胞傳感器接種于已滅菌的LB培養(yǎng)基中，并在搖床中以30℃、200rpm的條件過(guò)夜生長(zhǎng)，直到細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)末期(OD600＝2.400)；

(2)細(xì)胞傳感器洗滌：取生長(zhǎng)好的菌液20mL在4℃下離心，轉(zhuǎn)速4000r/min，離心10min。去掉上清液后用用滅菌的磷酸緩沖液((NH)₂HPO₄3.0g/L，KH₂PO41.2g/L，NaCl5.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L)洗滌、重懸；重復(fù)重懸、離心2次后，菌體用5mL磷酸緩沖液重懸；

(3)細(xì)胞傳感器固定化：在5mL菌液中加入等體積已滅菌的海藻酸鈉(4％)溶液；充分混合后，在距離CaCl₂(2％)溶液液面10crm以上的位置，通過(guò)針頭逐滴加入CaCl₂溶液中并形成球狀顆粒；使用磁力攪拌器對(duì)CaCl₂溶液進(jìn)行低速攪拌2h，之后含有細(xì)胞傳感器的固定化顆粒用已滅菌的生理鹽水洗滌，并保存于冰箱4℃中待用；

(4)信號(hào)檢測(cè)：將50個(gè)含有細(xì)胞傳感器的固定化顆粒加入到50mL含有苯系物染污的培養(yǎng)基中，在以30℃、200rpm的條件下運(yùn)行；之后取4個(gè)固定化顆粒置于96孔板中，通過(guò)全波長(zhǎng)掃描式多功能酶標(biāo)儀對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行掃描，完成檢測(cè)。