[發明專利]山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒及制備、使用方法

無效

• 申請號: 201210142444.X
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102634601A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 周碧君;張雙翔;程振濤;文明;王開功
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/35
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 吳無懼

1.一種山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：本試劑盒的原料配方為：1000~2000μL??PCR反應液，100~200μL??Taq?DNA聚合酶，50~100μL?陽性對照、50~100μL?陰性對照和1mL~2?mL?超純水。

2.根據權利要求1所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：PCR反應液包括引物1混合液、引物2混合液、PCR反應緩沖液和dNTP，四種液體于PCR反應液中體積比為2:2:5:1。

3.根據權利要求2所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：引物1為針對Mycoplasma?mycoides?cluster?16S?rRNA基因通用引物Ps與Pa，引物濃度為10μmol/?L，引物序列見表1：

表1?引物1（Ps與Pa）序列

引物序列（5’—3’）PsGGGAGGCAGCAGTAGGGAATPaCAGCGTCAATAACAAGCCAGTAAG

。

4.根據權利要求2所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：引物2為針對Mycoplasma?ovipneumoniae?16S?rRNA基因特異性引物Ms與Ma，引物濃度為10μmol/?L，引物序列見表2：

表2?引物2（Ms與Ma）序列

引物序列（5’—3’）MsAAACTATGTGCCAGCAGCGTAAGMaCACCATCTGTCATCTCGTTAGCC

。

5.根據權利要求2所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：PCR反應緩沖液為10×Taq?Buffer并含Mg²⁺，該PCR反應緩沖液包括200mmol/L?Tris-HCl、pH8.4，200mmol/L?KCl，100mmol/L-?(NH₄)₂SO₄和15mmol/L?MgCl₂。

6.根據權利要求2所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：dNTP為dATP、dGTP、dTTP、dCTP和dUTP在內等量混合游離核苷酸，其濃度為10mmol/?L。

7.根據權利要求1所述的山羊傳染性胸膜肺炎病原檢測雙重PCR診斷試劑盒，其特征在于：Taq?DNA聚合酶，其濃度為2.5U/μL/μL。