[發(fā)明專利]環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的引物組和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210142324.X
• 申請日: 2008-09-16
• 公開（公告）號: CN102676672A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張明洲;陳宗倫;方美明;方結(jié)紅;龔云飛
• 申請（專利權(quán)）人: 中國計量學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

1.環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的引物，其特征在于：所述的引物為一套單增李斯特菌特征性引物組，一套引物組由兩對引物組成，一對引物為外引物，一對為內(nèi)引物，序列分別為：

外引物1：ACTGGTTTCGTTAACGGTAA?

外引物2：TGTCACCGCTTTTGACAG?

內(nèi)引物1：AGGTGCAGCTTGTTGAGTAGTAGTTTTGCAGTAAGCACTCCAGTTG?

內(nèi)引物2：CCTGCGCCTAAAGTAGCAGAATTTTGTGTGTAGTAGCATTTTGATCT。

2.環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括如權(quán)利要求1所述的引物組、反應(yīng)液、Bst?DNA聚合酶、樣品預(yù)處理液和陽性對照液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述的引物組由體積比為1：1：4：4的20-30μM外引物1、外引物2、內(nèi)引物1與內(nèi)引物2組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述的反應(yīng)液是由體積比為5：2：1：2的10×Thermopol?反應(yīng)緩沖液、?7.5～12.5mM?dNTP,?100-200mM?MgSO₄與25～37.5M?甜菜堿組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述的10×Thermopol?反應(yīng)緩沖液含有200?mM??pH8.8三羥基甲基氨基甲烷鹽酸鹽、100?mM氯化鉀、100?mM硫酸銨、20?mM硫酸鎂和體積百分比濃度為1%曲拉通X-100。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：Bst?DNA聚合酶每微升含8～16個活性單位。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：樣品預(yù)處理液是由20mM??pH?8.0??Tris-HCl?，2mM?EDTA，體積百分比濃度為1.2%曲拉通X-100組成。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：該試劑盒還包括顯色劑，顯色劑為熒光染料。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)快速檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：陽性對照液為單增李斯特菌標(biāo)準(zhǔn)菌株基因組DNA。