[發明專利]EGFR外顯子19多態性檢測試驗用寡核苷酸及其用途

有效

• 申請號: 201210137005.X
• 申請日: 2012-05-02
• 公開（公告）號: CN102776276A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 井口亞希
• 申請（專利權）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

1.一種EGFR外顯子19多態性檢測試驗用寡核苷酸，其為從包括下述(P1)和(P’)的組中選擇的至少一種寡核苷酸：

(P1)寡核苷酸，其3’末端側被進行了延長抑制處理，并且其相對于含有序列編號1所示的堿基序列的至少第115位～第123位堿基的堿基長9～80的堿基序列具有至少80％以上的同一性；以及

(P1’)寡核苷酸，其3’末端側被進行了延長抑制處理，并且其與含有序列編號1所示的堿基序列的至少第115位～第123位堿基的堿基長9～80的堿基序列的互補鏈在嚴謹條件下雜交。

2.根據權利要求1所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，所述多態性檢測試驗用寡核苷酸為從包括下述(P2)和(P2’)的組中選擇的至少一種寡核苷酸：

(P2)寡核苷酸，其3’末端側被進行了延長抑制處理，并且其相對于含有序列編號1所示的堿基序列的至少第104～123位堿基的堿基長20～80的堿基序列具有至少80％以上的同一性；以及

(P2’)寡核苷酸，其3’末端側被進行了延長抑制處理，并且其與含有序列編號1所示的堿基序列的至少第104位～第123位堿基的堿基長20～80的堿基序列的互補鏈在嚴謹條件下雜交。

3.根據權利要求2所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述(P2)或(P2’)的寡核苷酸在從5’末端起數第1～3位的位置具有與所述第104位的堿基對應的堿基。

4.根據權利要求2所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述(P2)或(P2’)寡核苷酸在5’末端具有與所述第104位的堿基對應的堿基。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述多態性檢測試驗用寡核苷酸的堿基長為25～50。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述多態性檢測試驗用寡核苷酸的堿基長為26～42。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述3’末端側的延長抑制處理為磷酸基的添加。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸，其中，所述多態性檢測試驗用寡核苷酸的堿基序列上的堿基用熒光染料標記。

9.一種多態性檢測方法，用于檢測EGFR外顯子基因的多態性，包括：使用至少一種權利要求1至8中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸來檢測EGFR外顯子19的多態性。

10.根據權利要求9所述的多態性檢測方法，包括：

準備可能包含具有序列編號1所示的堿基序列的單鏈核酸的核酸試樣；

使所述多態性檢測試驗用寡核苷酸和所述單鏈核酸接觸，來獲得含有該多態性檢測試驗用寡核苷酸和該單鏈核酸并且該單鏈核酸的核酸擴增被抑制的雜交體；以及

對該多態性檢測試驗用寡核苷酸和該單鏈核酸接觸時或者接觸后的所述核酸試樣進行核酸擴增。

11.根據權利要求10所述的多態性檢測方法，其中，在能夠與含有作為靶標的EGFR外顯子19的多態性位點的核酸雜交的探針的存在下進行所述核酸擴增。

12.根據權利要求11所述的多態性檢測方法，其中，所述探針相對于所述多態性檢測試驗用寡核苷酸的堿基序列具有45％以上的同一性。

13.根據權利要求11或12所述的多態性檢測方法，其中，所述探針是在未與靶標序列雜交時發出熒光而與該靶標序列雜交時熒光強度減少的探針。

14.一種EGFR酪氨酸激酶抑制劑的藥效判定方法，包括：

通過權利要求9至13中任一項所述的多態性檢測方法來檢測EGFR外顯子19中的多態性；以及

基于所述檢測結果來判定對EGFR酪氨酸激酶抑制劑的耐受性或EGFR酪氨酸激酶抑制劑的藥效。

15.一種EGFR多態性檢測試驗用試劑盒，包含至少一種權利要求1至8中任一項所述的多態性檢測試驗用寡核苷酸。

16.根據權利要求15所述的EGFR多態性檢測試驗用試劑盒，還包含：能夠與含有作為靶標的EGFR外顯子19的多態性位點的核酸序列雜交的探針。