[發明專利]一種快速測定土壤微生物碳代謝能力的微孔板培養法

無效

• 申請號: 201210134587.6
• 申請日: 2012-05-03
• 公開（公告）號: CN102899380A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 楊超;谷立坤;許安定;丁偉;谷保祥;張慶甫;陳益銀;陳海濤;蔣士君;張建云
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司重慶市公司煙草科學研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種快速測定土壤微生物碳代謝能力的微孔板培養法，可以對環境微生物群落及純化單菌株進行碳代謝能力實驗，屬于生物技術領域。

背景技術

土壤微生物具有重要的環境功能，作為土壤生態系統中最活躍的部分，行使著分解土壤中動、植物殘體和轉化有機質的重要功能，是植物養分的源或庫，它能促進土壤中能量流動和養分循環，是土壤生態系統的重要組分，是土壤肥力水平的活指標，是土壤活性大小的標志，一般來講，肥沃的土壤多擁有豐富的微生物種類，及較高的土壤微生物多樣性和總量。土壤微生物在治理各類土壤環境污染、維持生態服務功能以及促進土壤持續利用等方面具有重要意義。微生物作為有機物分解、養分轉化的中介者，其數量及活力直接影響進入土壤中有機物和污染物的分解轉化速度，因而直接影響作物的產量和環境的質量。

土壤中的有機碳庫是陸地生態系統重要的碳庫之一，土壤有機碳在很大程度上影響著土壤結構的形成和穩定性、土壤的緩沖性能和持水性能以及植物營養的生物有效性，起著緩解和調節與土壤退化及土壤生產力有關的一系列土壤過程，是土壤質量評價和土地可持續利用管理中的重要指標，也是表征土壤肥力高低的重要指標之一。作為土壤中重要的膠結物質，土壤有機碳影響土壤的物理性質和土壤的保肥與供肥性能，對土壤酸堿和有毒物質具有緩沖能力，是土壤良好的緩沖劑，其含量直接影響土壤肥力和作物產量的高低。作為土壤有機碳庫的易分解、礦化部分，土壤活性碳是指土壤中移動快，并影響了植物生長，它們也是土壤微生物活性能源，從而進一步對調節土壤養分流有很大影響。當土壤中的有機碳總量一定是，微生物碳代謝能力的不同將會對土壤活性碳含量造成影響，宏觀上表現為有機物分解速度、養分轉化效能，植物生長快慢產生影響，因此，土壤微生物群落碳代謝能力可以作為微生物在土壤養分轉化，植物營養利用上的一個指標。一般來講，土壤微生物量碳含量越高，土壤養分轉化使用效率越高，土壤養分越充足。

碳代謝能力作為土壤微生物代謝能力的一種重要指標，目前的比較方法還比較有限并且具有一定應用缺點，如目前微生物群落生理活性研究較為先進的方法是Biolog-Eco板培養法，Biolog-Eco板碳源種類為31種，由于其主要成色劑紅四氮唑能夠對生物細胞產生毒害，從而低估了微生物區系利用不同碳源的能力。本發明采用常用的96孔細胞培養板培養法，成色物質為WST-8(也稱CCK-8，學名2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，該物質對生物細胞無明顯毒害作用，同時在水中具有較高的溶解度，通過一定的實驗重復，共設置了47種土壤常見碳源，確立了標準化的培養及測定方法，從而更加準確的評價了微生物群落碳代謝多樣性及能力，具有一定的應用潛力。

發明內容

本發明的目的是為提供一種快速測定土壤微生物碳代謝能力的微孔板培養法。為了實現上述目的，本發明采用的技術方案技術特征為：

(1)配制無碳源液體基礎培養基，其成分為：KH₂PO₄?1g/L；K₂HPO₄，g/L；KCl，0.25g/L；MgSO₄·7H₂O，0.5g/L；尿素2g/L，(NH₄)₂SO₄?2g/L，2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽，200-500mg/L。

(2)分裝步驟1配制液體基礎培養基，向分裝后基礎無碳源培養基中添加下列47種碳源中的1種：D-纖維二糖、蔗糖、D-甘露醇、α-環式糊精、β-環式糊精、i-赤蘚糖醇、甘油/丙三醇、L-阿拉伯糖、吐溫40、吐溫80、L-鼠李糖、D-阿洛酮糖、肝糖、D-山梨醇、松二糖、γ-羥丁酸、D-木糖/戊醛糖、D-海藻糖、D-蜜三糖/棉子糖、1-磷酸葡萄糖、D-半乳糖醛酸、戊五醇/核糖醇、乙酸、檸檬酸、D-蘋果酸、α-丁酮酸、α-羥丁酸、衣康酸、D，L-α-磷酸甘油、β-甲基-D-葡萄糖苷、丙酮酸甲酯、菊糖、D-葡糖胺酸、N-乙酰-D葡萄糖氨、4-羥基苯甲酸、L-丙氨酸、L-天門冬酰胺、甘氨酰-L-谷氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、α-D-乳糖、苯乙胺、腐胺、肌醇。碳源充分溶解，并保證每種碳源添加量均為3g/L，高壓蒸汽滅菌后避光保存。