[發明專利]轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201210128803.6
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102634593A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 李志勇;蔡穎;陳源樹;唐羿;肖艷文;石磊
• 申請（專利權）人: 廣州迪澳生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及轉基因植物品種的檢測方法，具體涉及轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

轉基因玉米作為目前世界上最主要的轉基因作物之一，占全世界轉基因作物種植面積的30%以上，僅次于轉基因大豆。

從世界范圍看，轉基因玉米的推廣已經帶來了巨大的社會和經濟效益。然而轉基因玉米在帶來巨大社會和經濟效益的同時也存在許多問題，主要集中在轉基因食品的安全性以及對生態環境的安全性方面，包括對人和動物健康的風險，對生態環境與農業的風險，對非目標生物的風險。針對第一種風險，1993年，聯合國經濟發展與合作組織（OECO）提出了食品安全性評估的“實質等同性”原則。如果準基因作物生產的產品與傳統產品具有實質等同性，則可以認為是安全的。最早提出對轉基因食品進行標識管理的是歐盟，1998年，歐盟在世界上簽署第一個法案，要求對轉基因產品進行標簽說明；1999年，要求出口到歐盟的非轉基因產品不得含有1%的轉基因產品污染；2002年，歐盟將標識的最低限量降低到0.9%。日本，澳大利亞，新西蘭對轉基因成分的最低含量做了不同規定，域值從1～5%不等。

我國于2001年5月9日公布并實施《農業轉基因生物安全管理條例》，于2002年1月5日公布了農業轉基因生物安全評價，標識和進口安全管理三個配套管理辦法，確定了第一批實施標識管理的農業轉基因生物目錄，并于2002年3月20日起正式實施。

為了能夠對轉基因作物及其產品做出綜合評價，除了需要各國政府和國際機構制定科學的安全評價體系以及嚴格的管理法規外，建立有效的方法體系對轉基因作物進行檢測也很重要，這是對轉基因作物進行安全性評價和實施監管的基礎，也是農產品國際貿易健康發展的重要保障。

轉基因產品的檢測要求方法要快速，準確，靈敏，并且還得考慮適應大樣品量，目標基因種類多等特點。因此，目前轉基因作物的檢測主要是檢測樣品是否含有外源蛋白質（基因表達產物）和是否含有外源基因（DNA）。轉基因作物中外源蛋白可以利用基于免疫原理的酶聯免疫吸附法（ELISA）試紙條檢測、Western雜交等方法檢測，主要從待測樣品中按照一定的程序抽提含有目的蛋白的基質，利用與目的蛋白（抗原）特異性結合的特性，通過偶聯抗體與抗原抗體復合物的作用產生可檢測的信號，但是這種方法要求高質量高穩定性的抗體，否則因準確性不夠，只能作為輔助檢測手段。轉基因作物的核酸檢測方法主要有兩種：核酸分子雜交技術(Sourthernblot)，PCR檢測技術。其中PCR檢測方法是最主要，最準確地檢測轉基因作物的方法，包括定性PCR方法，符合PCR方法，巢式PCR方法，競爭性定量PCR方法，熒光定量PCR方法等等。

目前，國內外推廣使用的是定性PCR和實時定量PCR檢測方法：PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。通過聚合酶的作用，在體外快速特異地擴增目的片段，使微量、特定目的DNA片段在幾小時內迅速擴增到百萬倍，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色后很容易觀察，因而具有快速靈敏等優點。然而，PCR方法反應體系和操作過程比較復雜，需要專業人員；所需PCR儀價格在5萬元左右，擴增時間2～3小時，擴增結果的電泳時間需要1小時左右；電泳常用染料EB為強致癌物質，有較強毒性，且難以實行現場檢測。所以，在科學研究和生產實踐中均需要一種快速簡便、操作準確、容易普及、安全可靠且適用于現場操作的轉基因作物檢測方法。

環介導等溫基因擴增技術（Loop-Mediated?Isothermal?Amplification，以下簡稱LAMP法）是日本榮研化學株式會社于2000年前后開發出的基因擴增技術，其具有快速簡便、操作準確、容易普及、安全可靠的優點，目前尚未有將LAMP法應用于快速檢測轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的試劑盒。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的LAMP檢測引物組。

本發明的目的在于提供一種轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的LAMP檢測試劑盒。

本發明的另一個目的在于提供一種基于上述檢測引物組和檢測試劑盒的轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的恒溫基因擴增檢測方法。

本發明所采用的技術方案如下：

轉基因玉米EVENT98140及其衍生品種的LAMP檢測引物組，包括外引物1、外引物2、內引物1和內引物2，其核苷酸序列分別如下所示：