[發(fā)明專(zhuān)利]一種通過(guò)CD226基因檢測(cè)胃癌易感性的試劑盒及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210124430.5
• 申請(qǐng)日: 2012-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102660643A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張淳;周萍;李建平;呂國(guó)強(qiáng);李成萬(wàn)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 無(wú)錫市第三人民醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 殷紅梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疾病易感性檢測(cè)用的試劑盒，具體地說(shuō)是一種通過(guò)CD226基因檢測(cè)胃癌易感性的試劑盒及其用途，其通過(guò)檢測(cè)絲裂原活化蛋白激酶激酶4(CD226)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)來(lái)預(yù)測(cè)胃癌的易感性，屬于醫(yī)療研究技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

胃癌發(fā)病率居消化道腫瘤的首位，列全部惡性腫瘤的第三位。我國(guó)每年死于胃癌者約為16萬(wàn)人。癌癥的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段、多基因變異的過(guò)程。腫瘤細(xì)胞和機(jī)體免疫系統(tǒng)的相互作用一直貫穿于整個(gè)過(guò)程中。作為調(diào)節(jié)T細(xì)胞和NK細(xì)胞功能的關(guān)鍵分子，CD226參與了對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的調(diào)控。大量的研究表明，腫瘤免疫調(diào)控相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)可以通過(guò)改變這些基因的表達(dá)水平的方式，影響這些基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。

SNP(Single?nucleotide?polymorphism)，即單核苷酸多態(tài)性，是人類(lèi)基因組作圖的第三代遺傳標(biāo)記，主要是指一類(lèi)基于單堿基變異引起的DNA序列多態(tài)性，包括單堿基轉(zhuǎn)換、顛換，以及單堿基的插入/缺失等。它是基因組最廣泛存在的一類(lèi)多態(tài)性標(biāo)記，已成為研究基因組多態(tài)性和識(shí)別、定位疾病相關(guān)的一種工具。1996年成功研制了SNP檢測(cè)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，還實(shí)現(xiàn)了判斷結(jié)果的自動(dòng)性。可利用熒光定量PCR技術(shù)研發(fā)檢測(cè)疾病易感性的試劑盒。

CD226是由Shibuya等人于1996克隆成功的，并在2000年第七屆人類(lèi)白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組大會(huì)上獲得了CD226的編號(hào)。人CD226基因定位于染色體18q22-23上，成熟的蛋白由318個(gè)氨基酸組成。該分子為一個(gè)67kD大小的I型跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，胞膜外區(qū)由232個(gè)氨基酸組成，含有2個(gè)V樣結(jié)構(gòu)域；胞漿區(qū)有61個(gè)氨基酸，胞漿區(qū)尾部含有一段EIYVNY基序，可作為非受體型蛋白酪氨酸激酶的底物，并可以和蛋白酪氨酸激酶2氨基端的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合。另外，在CD226胞漿區(qū)還存在著酪氨酸激酶II和PKC作用的底物S/T結(jié)構(gòu)。CD226主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨核/血小板譜系以及活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)合胞漿的上述結(jié)構(gòu)和基序，提示CD226分子可能參與T細(xì)胞、NK和血小板活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。

將CD226特異性單抗Leo-A1mAb或其F(ab’)2片段加入MCL或T細(xì)胞培養(yǎng)體系中能抑制T細(xì)胞向細(xì)胞毒T細(xì)胞分化，且只能在MLC初期發(fā)揮作用。在殺傷階段，針對(duì)CD226另一功能表位的特異性單抗DX11mAb能在殺傷相抑制CTL對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的殺傷。此外，共聚焦顯微鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)：CD226集中分布與T細(xì)胞與APC或靶細(xì)胞的接觸面，目前所發(fā)現(xiàn)的能與CD226發(fā)生相互作用的分子都是與細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)及免疫突觸形成有關(guān)的分子，這些都提示CD226參與了T細(xì)胞免疫突觸的形成。而且研究還發(fā)現(xiàn)，CD226是一種NK細(xì)胞活化性膜受體，主要表達(dá)于活化的NK細(xì)胞。在重導(dǎo)向殺傷系統(tǒng)中，加入LeoA1-mAb，能明顯提高NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷率。

rs57613010是位于第18號(hào)染色體CD226基因啟動(dòng)子區(qū)域的一個(gè)T＞G多態(tài)。其在世界人群的頻率分布，T占0.62，G占0.38左右。中國(guó)人群的分布T占0.45，G占0.25左右。分子生物學(xué)研究表明，T＞G的替代可增加CD226基因啟動(dòng)子與核蛋白的結(jié)合，增加CD226基因的表達(dá)。通過(guò)大規(guī)模人群的胃癌病例對(duì)照研究，CD226基因啟動(dòng)子區(qū)域的T＞G多態(tài)與胃癌發(fā)生相關(guān)，并且呈基因劑量-反應(yīng)關(guān)系。即使在調(diào)整年齡、性別、吸煙、腫瘤家族史等多種混雜因素后，這種相關(guān)性仍然存在。發(fā)明人的研究還顯示rs57613010與散發(fā)性腸癌及鼻咽癌的發(fā)生相關(guān)，均表現(xiàn)為rs57613010基因型為G時(shí)腫瘤發(fā)生率降低。這個(gè)SNP的多態(tài)可用于評(píng)估個(gè)體胃癌的易感性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，提供一種通過(guò)CD226基因檢測(cè)胃癌易感性的試劑盒及其用途，其通過(guò)檢測(cè)絲裂原活化蛋白激酶激酶4(CD226)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)來(lái)預(yù)測(cè)胃癌的易感性。

按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案：一種通過(guò)CD226基因檢測(cè)胃癌易感性的試劑盒，包括盒體和裝于盒體內(nèi)的物質(zhì)，其特征在于：所述盒體內(nèi)的物質(zhì)包括檢測(cè)CD226基因上的rs57613010號(hào)SNP位點(diǎn)的特異性引物及特異性熒光探針、Taq?DNA聚合酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液和去離子水；

所述特異性引物中的正義引物和反義引物的序列為：

正義引物：5’-AACTAGTATCTAAGGTAGACCTTGGGTAGTG-3’，