[發明專利]一種TaqMan探針熒光RT-PCR檢測創傷弧菌的非診斷性方法

無效

• 申請號: 201210122760.0
• 申請日: 2012-04-24
• 公開（公告）號: CN102827925A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 韓輝;徐寶梁;李海山;胡群;劉豐;周蕾
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/63
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司 11003
• 代理人: 張飆

1.一種TaqMan探針熒光RT-PCR檢測創傷弧菌的非診斷性方法，其特征在于，該非診斷性方法包括：

以創傷弧菌溶血素vvhA基因的DNA序列作為靶序列，比對后選取保守區域，確定vvhA基因的保守序列：

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設計創傷弧菌實時PCR引物和探針：

2.如權利要求1所述的非診斷性方法，其特征在于，所述擴增產物的序列及引物和探針的位置如圖8所示。

3.如權利要求1所述的非診斷性方法，其特征在于，所述探針VVH-P的5’端所標記熒光素為FAM，探針3’端連接淬滅基團。?

4.如權利要求3所述的非診斷性方法，其特征在于，所述該淬滅基團為BHQ1非熒光淬滅基團。

5.如權利要求1所述的非診斷性方法，其特征在于，所述該非診斷性方法包括步驟：

1)提取細菌染色體DNA；

2)實時熒光RT-PCR反應，配制PCR反應體系，混勻后短暫離心分裝到PCR管中；

3)將待測樣品加入到反應體系中，進行擴增；

4)在退火階段收集熒光信號，檢測Ct值。

6.如權利要求5所述的非診斷性方法，其特征在于，所述實時熒光RT-PCR反應的體系組分及其體積如下：

循環條件：

7.如權利要求5所述的非診斷性方法，其特征在于，所述VVH-F和VVH-R濃度均為200nmol/L。

8.如權利要求5所述的非診斷性方法，其特征在于，所述VVH-P探針濃度為100nmol/L。

9.如權利要求5所述的非診斷性方法，其特征在于，反應溫度為60℃。?