[發(fā)明專利]阿克尼茄素B和E的分離制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210120869.0
• 申請(qǐng)日: 2012-04-24
• 公開（公告）號(hào): CN102643321A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉東鋒;郭琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07J19/00
• 分類號(hào): C07J19/00;C07J71/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然植物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及阿克尼茄素B和E的分離制備方法。

背景技術(shù)

阿克尼茄素B（Acnistin?B）分子式為C₂₈H₃₆O₅，分子量為452.59；阿克尼茄素E（Acnistin?E）分子式為C₂₈H₃₈O₇，分子量為486.61，均為甾體類化合物。主要分布于茄科植物中，如枝花阿克尼茄樹Acnistus?ramiflorum?Miers.葉、Dunalia?solanacea?H.B.K.葉中。阿克尼茄素B和阿克尼茄素E均具有免疫抑制作用，對(duì)人淋巴細(xì)胞測試表明，能抑制³H-胸苷的攝入，在劑量為1μg/mL時(shí)，抑制率分別為80%和77%。阿克尼茄素E還具有抗腫瘤作用，對(duì)P388細(xì)胞呈邊緣活性。

目前尚未檢索到利用超臨界流體萃取方法同時(shí)制備阿克尼茄素B和E的方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供阿克尼茄素B和E的分離制備方法，該方法可制備得到高純度的阿克尼茄素B和E。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

阿克尼茄素B和E的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

A.超臨界萃?。簩⑺幉牟捎贸R界CO₂流體萃取，以50-80%乙醇為夾帶劑，萃取3-6小時(shí)，收集萃取物；B.溶劑萃?。簩⑤腿∥镉谜〈驾腿。玫秸〈驾腿∥?；C.脫色：將正丁醇萃取物過D941大孔樹脂柱，收集下注液；D.色譜柱層析：將下注液減壓濃縮，過中壓硅膠柱分離，二氯甲烷-甲醇洗脫，分段收集洗脫液，分別得到阿克尼茄素B和阿克尼茄素E；E.結(jié)晶：回收收集的洗脫液中的溶劑，再采用乙醇、石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇混合溶劑重結(jié)晶，分別得到阿克尼茄素B和阿克尼茄素E。

步驟A中所述超臨界CO₂萃取壓力為28-35MPa，萃取溫度為35-55℃，分離釜壓力為5-7MPa，分離溫度為25-45℃。

步驟D中所述二氯甲烷-甲醇洗脫按二氯甲烷-甲醇體積比20:1-4:1進(jìn)行梯度洗脫。

本發(fā)明的優(yōu)勢在于：本發(fā)明采用超臨界CO₂處理?xiàng)l件較溫和，實(shí)現(xiàn)對(duì)植物有效成分的初級(jí)分離，提高提取率，環(huán)境污染小、提率高、生產(chǎn)周期短，參數(shù)易于控制，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

????將Dunalia?solanacea?葉干燥并粉碎至60目后置入超臨界萃取釜中，用超臨界CO₂夾帶60%乙醇進(jìn)行預(yù)處理，動(dòng)態(tài)萃取，控制萃取釜壓力19.2MPa，萃取溫度48℃，分離壓力6MPa，分離溫度38℃，時(shí)間為3.5h后停止，收集萃取物，用正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取物過D941大孔樹脂柱，收集下注液，將下注液減壓濃縮后加少量硅膠拌勻低溫烘干，裝入中壓硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，其中二氯甲烷-甲醇的體積比為20:1-4:1，在洗脫過程中，以HPLC在線監(jiān)測定位，分段收集洗脫液，依次得到阿克尼茄素E和阿克尼茄素B的洗脫液，回收收集的各洗脫液中的溶劑，然后用乙醇對(duì)阿克尼茄素E進(jìn)行結(jié)晶，得到阿克尼茄素E，用石油醚-乙酸乙酯對(duì)阿克尼茄素B進(jìn)行結(jié)晶得到阿克尼茄素B晶體。

實(shí)施例2：

????將Dunalia?solanacea?葉干燥并粉碎至60目后置入超臨界萃取釜中，用超臨界CO₂夾帶60%乙醇進(jìn)行預(yù)處理，動(dòng)態(tài)萃取，控制萃取釜壓力22.6MPa，萃取溫度50℃，分離壓力6MPa，分離溫度42℃，時(shí)間為6h后停止，收集萃取物，用正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取物過D941大孔樹脂柱，收集下注液，將下注液減壓濃縮后加少量硅膠拌勻低溫烘干，裝入中壓硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，其中二氯甲烷-甲醇的體積比為20:1-4:1，在洗脫過程中，以HPLC在線監(jiān)測定位，分段收集洗脫液，依次得到阿克尼茄素E和阿克尼茄素B的洗脫液，回收收集的各洗脫液中的溶劑，然后用乙醇對(duì)阿克尼茄素E進(jìn)行結(jié)晶，得到阿克尼茄素E，用石油醚-乙酸乙酯對(duì)阿克尼茄素B進(jìn)行結(jié)晶得到阿克尼茄素B晶體。

實(shí)施例3：