[發(fā)明專利]甲狀腺素磁微粒熒光發(fā)光免疫分析試劑盒及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210116855.1
• 申請(qǐng)日: 2012-04-19
• 公開（公告）號(hào): CN102662068A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李子樵;曹紋野
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海藍(lán)怡科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/78
• 分類號(hào): G01N33/78;G01N33/543
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

[技術(shù)領(lǐng)域]

本發(fā)明涉及一種免疫分析醫(yī)學(xué)中的檢測(cè)試劑盒，具體設(shè)計(jì)一種甲狀腺素磁微粒熒光發(fā)光免疫分析試劑盒及其制備方法。該試劑盒結(jié)合了免疫磁微粒分離技術(shù)和熒光免疫分析技術(shù)，檢測(cè)范圍寬，靈敏度高，抗干擾強(qiáng)。

[背景技術(shù)]

甲狀腺疾病是常見的內(nèi)分泌疾病，全球患病人數(shù)已超3億，中國(guó)患者超過6.7千萬，且呈逐年增加。最新的《中國(guó)十城市甲狀腺病流行病學(xué)調(diào)查》統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，我國(guó)十城市的甲亢患病率為3.7％、甲減患病率為6.5％、甲狀腺結(jié)節(jié)患病率為18.6％。因甲狀腺疾病具有多發(fā)性，臨床癥狀多樣性及復(fù)雜性的特點(diǎn)，血清甲狀腺激素測(cè)定在臨床中應(yīng)用十分廣泛。本試劑盒用于定量檢測(cè)人血清中的總甲狀腺素(TT4)的含量。

T4是甲狀腺分泌的主要產(chǎn)物，也是構(gòu)成下丘腦-垂體前葉-甲狀腺調(diào)節(jié)系統(tǒng)完整性不可缺少的成份。對(duì)合成代謝有影響作用。T4由二分子的二碘酪氨酸(DIT)在甲狀腺內(nèi)偶聯(lián)生成。T4與甲狀腺球蛋白結(jié)合貯存在甲狀腺濾泡的殘腔中，在TSH的調(diào)節(jié)下分泌釋放。T4及其相關(guān)的甲狀腺激素T3負(fù)責(zé)對(duì)人體中各種生化過程進(jìn)行調(diào)節(jié)，這些過程是正常新陳代謝和神經(jīng)活動(dòng)的基礎(chǔ)。盡管T3具有很強(qiáng)的生物能量，但T4通常以約50倍于循環(huán)T3的形式存在于人血清中。血清中99％以上的T4以與其它蛋白質(zhì)結(jié)合的形式存在，不具生物學(xué)活性。由于血清中運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)的濃度易受外源性和內(nèi)源性作用的影響，因此，在檢測(cè)血清T4濃度的過程中需考慮到結(jié)合蛋白質(zhì)的狀況。如果忽略這一點(diǎn)，會(huì)導(dǎo)致反映甲狀腺代謝狀況檢測(cè)的錯(cuò)誤結(jié)果。

血清總T4檢測(cè)是最早應(yīng)用于臨床檢測(cè)甲狀腺功能的甲狀腺激素，對(duì)于評(píng)價(jià)甲狀腺功能可以說功不可沒。正常成人血清TT4水平為64-154nmol/L(5-12ug/dl)。T4水平升高見于甲亢，高TBG血癥(妊娠，口服雌激素及口服避孕藥，家族性)，急性甲狀腺炎，亞急性甲狀腺炎，急性肝炎，肥胖癥，應(yīng)用甲狀腺激素時(shí)，進(jìn)食富含甲狀腺激素的甲狀腺組織等。水平降低可見于甲減，低TBG血癥(腎病綜合征，慢性肝病，蛋白丟失性腸病，遺傳性低TBG血癥等)，全垂體功能減退癥，下丘腦病變，劇烈活動(dòng)等。T4測(cè)定可用于甲亢、原發(fā)性和繼發(fā)性甲減的診斷以及TSH抑制治療的監(jiān)測(cè)等，具有較高的臨床診斷價(jià)值。

免疫學(xué)測(cè)定是以抗體-抗原的特異性識(shí)別、抗體標(biāo)記技術(shù)和示蹤技術(shù)為基礎(chǔ)的定量技術(shù)。在腫瘤標(biāo)志物的體液檢測(cè)中具有廣泛應(yīng)用。現(xiàn)有的甲狀腺激素的測(cè)定方法有平衡透析法、放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附分析法、時(shí)間分辨熒光免疫分析法、電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)及微孔板酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析法等。但這些方法都具有一定局限性，，如平衡透析法操作步驟繁瑣，操作時(shí)間長(zhǎng)；放射免疫分析方法的試劑具有放射性，會(huì)對(duì)操作人員的身體健康產(chǎn)生影響，操作不能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；酶聯(lián)免疫分析方法靈敏度低，步驟繁瑣；時(shí)間分辨熒光免疫分析法與電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法都需要較為昂貴的稀土元素作為試劑，不利于大范圍的推廣使用；微孔板酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析法則受到固相載體表面積的限制，無法實(shí)現(xiàn)較寬范圍的檢測(cè)。

在實(shí)際的免疫檢測(cè)中，由于待測(cè)樣品中所含的雜質(zhì)成分較多，一定程度上影響了檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性，所以從復(fù)雜的樣品基質(zhì)中快速分離、純化出目的待測(cè)無，是臨床檢驗(yàn)工作者面臨的難題之一。免疫磁微粒技術(shù)是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學(xué)偶聯(lián)等方法包被上具有特異性親合力的各種免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)，使其致敏為免疫磁微粒，具有分離速度快、效率高、可重復(fù)性好；操作簡(jiǎn)單；不影響被分離細(xì)胞或其它生物材料的生物學(xué)性狀和功能等特點(diǎn)，在外加磁場(chǎng)作用下定向運(yùn)動(dòng)，使得某些特殊成分得以分離、濃集或純化。

免疫磁微粒分析技術(shù)與熒光發(fā)光免疫分析技術(shù)結(jié)合檢測(cè)待測(cè)物，可大大提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，它以毫米級(jí)磁微粒為載體，利用表面有機(jī)物提供的羧基活性集團(tuán)與蛋白質(zhì)氨基共價(jià)結(jié)合，采用抗體進(jìn)行“搭橋”成免疫磁微粒，可進(jìn)行抗原、抗體反應(yīng)。該技術(shù)的新穎之處有：(1)采用微小的磁微粒作為固相可增加包被表面積，從而增加了抗原抗體的有效包被量，不僅節(jié)省了原料，而且有助于建立寬分為的免疫檢測(cè)方法，尤其適合于高濃度臨床樣本的測(cè)定，避免HOOK效應(yīng)的發(fā)生；(2)利用順磁鐵微粒為固相載體，外包抗原或抗體，增加抗原、抗體的接觸面積及底物發(fā)光面積，提高反應(yīng)的靈敏度，并采用旋轉(zhuǎn)磁場(chǎng)使磁微粒起攪拌作用及分離結(jié)合抗原-抗體與游離抗體的作用。