[發明專利]甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201210116855.1
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN102662068A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 李子樵;曹紋野
• 申請（專利權）人: 上海藍怡科技有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/543
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

1.一種甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，包括甲狀腺素系列標準品，T4-IgG包被的磁微粒，堿性磷酸酶標記的甲狀腺素抗體，熒光發光底物，樣本稀釋液，濃縮洗滌液，還包括一個反應測試杯。

2.根據權利要求1所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，其特征在于：所述反應測試杯為不透明聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯中的一種材料制成。

3.根據權利要求1所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，其特征在于：所述甲狀腺素抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

4.根據權利要求1所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，其特征在于：所述的熒光發光底物，包括凍干粉和底物溶解液；其中，底物凍干粉為磷酸-4-甲基傘形酮；底物溶解液為2-氨基-2甲基-1丙酮。

5.根據權利要求1所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，其特征在于：所述濃縮洗滌液為，濃度0.01-0.05M、pH值為7.0-7.6的磷酸鹽緩沖液，且緩沖液中含有0.01-0.05％的吐溫20和終濃度為8-14g/L的氯化鈉。

6.根據權利要求1所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒，其特征在于：所述樣本稀釋液為磷酸鹽緩沖液。

7.一種甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒的制備方法，采用如下工藝步驟：

A)甲狀腺素系列標準品的制備：用去激素人血清稀釋甲狀腺素純品，其濃度為0-360ng/ml；

B)T4-IgG包被磁微粒的制備：將粒徑為0.5-1mm的磁微粒靜置于含1-1.5ug/ml?T4-IgG，濃度為0.01M的碳酸鹽緩沖液中，室溫混勻10-30min后37℃過夜，取出，用稀釋好的濃縮洗滌液清洗1-3次，4℃封閉液過夜，洗1-3次并抽真空干燥，平均分配到反應測試杯中；

C)堿性磷酸酶標記的甲狀腺素抗體標記物的制備：T4單克隆抗體采用過碘酸鈉法與堿性磷酸酶交聯，用酶標記物稀釋液進行稀釋，稀釋比例為1∶3000，制成酶標工作液；

D)熒光發光底物的制備：去離子水中含0.01-0.05mM磷酸-4-甲基傘形酮，制成凍干粉；底物溶解液為，濃度0.1-0.5M、pH值9.0-11.0的2-氨基-2-甲基-1丙酮；

E)樣本稀釋液的制備：濃度為0.01-0.05M的磷酸鹽緩沖液，pH值為7.0-7.6。

F)濃縮洗滌液的制備：向步驟E中的磷酸鹽緩沖液中加入體積百分比為0.01-0.05％吐溫20和終濃度為8-14g/L的氯化鈉；

G)分裝步驟：取步驟C中制得的酶標工作液100ul-200ul平均分配到步驟B中含有磁微粒的反應杯中，并凍干封口；

H)將上述試劑組裝成試劑盒。

8.根據權利要求7所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒的制備方法，其特征在于：所述步驟B中，磁微粒為直徑0.05-1mm粒徑、四氧化三鐵內核、表面包裹帶有氨基活性基團的聚合物。

9.根據權利要求7所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒的制備方法，其特征在于：所述步驟B中，封閉液是含有質量百分比濃度為0.05％-0.5％明膠和0.05％-0.2％疊氮鈉的pH為7.4的濃度為0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液。

10.根據權利要求7所述的甲狀腺素磁微粒熒光發光免疫分析試劑盒的制備方法，其特征在于：所述步驟C中，酶標記物稀釋液為，含有0.4mg/ml?ANS和0.05％BSA的Tris-CL緩沖液，緩沖液的pH值為8.0。