[發明專利]生物組織培養繁育考來木的方法

有效

• 申請號: 201210115528.4
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN102613087A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 呂秀立;施季森;沈烈英;錢又宇;崔心紅;李永勝
• 申請（專利權）人: 上海市園林科學研究所;上海城投綠化科技發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種生物組織培養繁育考來木的方法，選取考來木外植體經表面消毒、初代培養、增殖培養、壯苗培養和生根培養獲得再生試管苗，并進行栽種，其特征在于按下列步驟進行：

a、所述考來木外植體是選擇生長健壯、無病蟲害的考來木的帶腋芽枝條作為起始外植體，用洗潔精擦洗表面后，流水沖洗20分鐘，再進行表面消毒處理；

b、將消毒處理后的外植體接種到初代培養基中，進行初代培養，其中，初代培養基為MS+6-BA0.15～0.25mg·L^-1+NAA0.15～0.25mg·L^-1+蔗糖25～35g·L^-1+瓊脂4～12g·L^-1；

c、將初代培養的無菌苗轉入增殖培養基，該增殖培養基為MS+BA0.1～2.5mg·L^-1+NAA0.1～2.5mg·L^-1+蔗糖20～40?g·L^-1+瓊脂4～12?g·L^-1，誘導不定芽；

d、將誘導出的叢生芽分切后，轉移至壯苗培養基，進行壯苗培養，壯苗培養基為MS+6-BA0.15～0.25mg·L^-1+IBA0.15～0.25mg·L^-1+蔗糖25～35?g·L^-1+瓊脂4～12?g·L^-1；?

e、將經壯苗培養生長到2.5cm以上的試管苗分切后，轉移至生根培養基中，該生根培養基為1/2MS+NAA0.5～4.5mg·L^-1+IBA0.5～2.5?mg·L^-1?+蔗糖15～35g·L^-1+瓊脂4～12g·L^-1；

f、對所得的生根試管苗進行清洗，移至珍珠巖、草炭土的混合基質中進行栽種。

2.根據權利要求1所述的生物組織培養繁育考來木的方法，其特征在于，步驟a中，所述的外殖體為帶腋芽的枝條切取成長度為0.5～2.5cm，腋芽位于中間的莖段，切去葉片，保留兩片葉柄基部保護腋芽生長點，進行消毒處理。

3.根據權利要求1或2所述的生物組織培養繁育考來木的方法，其特征在于，步驟a中，所述的消毒處理先用72%濃度的酒精消毒30～60s，再用無菌水沖洗3～4次，然后用加有0.1～0.2%的升汞液浸泡15～30分鐘，用無菌水沖洗至無殘留，得到無菌的外植體。

4.根據權利要求1所述的生物組織培養繁育考來木的方法，其特征在于，優選的初代培養基為：MS+6-BA0.2mg·L^-1+IBA0.2mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂6g·L^-1，在初代培養過程中，培養條件為無菌室內光周期為10~15小時/天，光照強度1500~2500lx，培養溫度為室溫，培養周期為22~28天。

5.根據權利要求1所述的生物組織培養繁育考來木的方法，其特征在于，步驟c中，所述的最佳增殖培養基為MS+BA2mg·L^-1+NAA1mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂6?g·L^-1，培養條件為無菌室內光周期為10~15小時/天，光照強度1500~2500lx，培養溫度為室溫，培養周期為28~32天，叢生芽增殖率為1：（4～5）。

6.根據權利要求1所述的生物組織培養繁育考來木的方法，其特征在于，步驟d中，優選的壯苗培養基為：MS+6-BA0.2mg·L^-1+IBA0.2mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂6g·L^-1，培養條件為無菌室內光周期為10~15小時/天，光照強度1500~2500lx，培養溫度為室溫，培養周期為18~22天，苗高達到2～6厘米，4～8對葉片。