[發明專利]鑒定雞新城疫病毒流行株與疫苗株的RT-PCR法

無效

• 申請號: 201210113485.6
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN103374631A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 張國中;唐娜;秦秀慧
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.鑒定雞新城疫病毒流行株與疫苗株的引物組合，其特征在于，其包括：

上游引物P1：5’-GTCGTGCTCAGTGATGTG-3’；

上游引物P2：5’-GCTCCGCCTACTCCGTCAG-3’；

下游引物P3：5’-TTGTTACCTCAATGTGCC-3’；以及

下游引物P4：5’-GCAGGAACTTGACTATGA-3’。

2.含有權利要求1所述引物組合的用于鑒定雞新城疫病毒流行株與疫苗株的試劑盒。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括隨機引物、反應緩沖液、dNTPs、Rnase抑制劑、反轉錄酶、PCR?Taq?mix、DEPC處理水中的一種或多種。

4.根據權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性標準模板。

5.鑒定雞新城疫病毒流行株與疫苗株的RT-PCR法，其特征在于，包括以下步驟：

1)樣本總RNA的提取；

2)反轉錄得到樣本cDNA；

3)以樣本cDNA為模板，使用權利要求1的引物組合進行PCR擴增；

4)分析PCR擴增產物，結果判定。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3)中PCR反應體系以20μl計為：

PCR反應條件為：95℃5min；94℃45s，53.5℃45s，71℃60s，共30個循環；71℃10min。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)中反轉錄生成cDNA的方法為：

在0.2ml離心管內加入下列成分：

RNA溶液????????????????????6μl

500μg/ml隨機引物??????????1μl

輕輕混勻，70℃水浴5min，冰浴2min；

然后向上述離心管中加入下列成分：

混勻，將上述反應體系置于37℃1h，95℃5min，得到樣本cDNA。