[發明專利]短柱肖菝葜藥材指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜

無效

• 申請號: 201210109432.7
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN102608236A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 姚梅芬;白水朋;李琳;仰振球;秦文杰;張思巨;海麗娜;胡紅宇
• 申請（專利權）人: 北京振東光明藥物研究院有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

技術領域

本發明涉及中藥材的質量控制方法，具體涉及短柱肖菝葜藥材高效液相色譜法指紋圖譜的構建方法和標準指紋圖譜。

背景技術

短柱肖菝葜(Heterosmilax?yunnanensis?Gagnep.)為百合科植物的干燥塊莖。主要分布于我國的貴州、四川、湖南等地。均收載于四川、貴州、湖南省中藥材標準中。民間習稱土茯苓或白土苓，與《中國藥典》收載的土茯苓不僅藥名相近，且歷代本草常以土茯苓記載，與土茯苓混用。《湖南植物志》記載白土苓“微苦、淡、澀，平，無毒”。具有清熱、除濕、解毒、通利關節的功效，臨床用于濕熱淋濁，帶下，疥癬，楊梅毒皰，筋骨攣痛，瘰疬癰腫及鉤端螺旋體等病^[1～3]。

由于短柱肖菝葜因品種、產地、采收期不同而造成質量參差不齊，因而其產品質量的穩定性也難以保證。目前對短柱肖菝葜的鑒定，往往是選取其一、二個活性成分或指標性成分進行含量測定，并以其含量多少來判定質量。例如，劉訓紅^[4]等用紫外分光光度法鑒別肖菝葜屬植物與土茯苓，姜榮蘭^[5]等用薄層色譜法對肖菝葜屬短柱肖菝葜、華肖菝葜、肖菝葜與菝葜屬土茯苓進行比較研究，傅澤民^[6]等對短柱肖菝葜、華肖菝葜和肖菝葜中的總皂苷成分用重量法進行含量測定。秦文杰^[7]等對短柱肖菝葜中總黃酮進行了含量測定并且用高效液相色譜法測定短柱肖菝葜中芒果苷的含量。目前對短柱肖菝葜的化學成研究較薄弱，已知的僅有以下文獻報道，張思巨^[8]等對華肖菝葜和短柱肖菝葜的揮發性成分進行了GC-MS分析，從短柱肖菝葜中鑒定了40個化合物，其中多為脂肪酸及其酯類，尚含有醇、醛、酮和烴類，萜類化合物極少，主成分為十六烷酸。秦文杰^[7]從短柱肖菝葜中共分離鑒定了29個化合物。如果用一、二個短柱肖菝葜的活性成分來說明其內在質量，具有一定的片面性，必須對它的物質群整體予以控制，從整體上有效地表征中藥質量。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，對有效控制中藥材或中成藥的質量，具有重要的意義。本申請人已在貴州建立了該藥材的撫育基地。對短柱肖菝葜10批藥材進行測定，建立短柱肖菝葜藥材指紋圖譜測定方法。

發明內容

本發明目的在于建立短柱肖菝葜藥材指紋圖譜的方法和標準指紋圖譜。

為達到本發明目的所采用的技術方案：用高效液相色譜法建立短柱肖菝葜藥材指紋圖譜的方法，具體包括如下步驟：

①供試品溶液的制備：精密稱取短柱肖菝葜藥材粉末，加入80％甲醇超聲提取，濾過，取續濾液，即得；

②參照物溶液的制備：精密稱取丁香酸葡萄糖苷對照品，用甲醇配制成每1ml含丁香酸葡萄糖苷0.1～0.5mg的溶液，作為參照物溶液；

③測定：分別精密吸取供試品溶液及參照物溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖；

其中色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為磷酸與乙腈組成的梯度洗脫液，檢測波長為210～300nm。

優選的，其中，所述供試品溶液的制備，方法如下：稱取短柱肖菝葜藥材粉末1.0g～5.0g，置于100～500ml具塞錐形瓶中，精密加入80％甲醇50～250ml，密塞，稱定重量，超聲處理60分鐘，放冷，再稱定重量用80％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，將濾液蒸干，殘渣用50％甲醇溶解轉移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

所述測定，采用精密吸取供試品溶液10～20μl注入高效液相色譜儀，得到色譜圖；

色譜條件為，采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為流動相為0.05～0.3％磷酸與乙腈組成的梯度洗脫液，柱溫20～40℃；紫外檢測：波長210～300nm；流速：0.5～1.2ml/分鐘min^-1；時間：90～120分鐘。

特別優選的，所述供試品溶液的制備，方法如下：稱取短柱肖菝葜藥材粉末1.0g，置錐形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40KHZ)60分鐘，放冷，再稱定重量，用80％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，將濾液蒸干，殘渣用50％甲醇溶解轉移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

所述色譜條件中流動相為0.05～0.3％磷酸與乙腈組成的梯度洗脫液；柱溫25℃；檢測波長為254nm；流速為每分鐘1.0ml；分析時間90分鐘。