[發(fā)明專利]一種分泌抗人β-actin蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210108863.1
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN102690787A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉如石;吳俊文;邱義蘭;許鳳;劉勝姿;李小曼
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南師范大學(xué)
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/06;C07K16/18
• 代理公司: 北京知本村知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11039
• 代理人: 劉江良

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，其涉及一種雜交瘤細(xì)胞，具體涉及一種分泌抗人β-actin蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。?

背景技術(shù)

Actin即“肌動蛋白”是一種中等大小的蛋白質(zhì)，外觀呈啞鈴狀，由一個高度保守的基因編碼375個氨基酸組成。單體肌動蛋白的相對分子質(zhì)量為43kDa，有三個結(jié)合位點，其中一個是ATP結(jié)合位點。肌動蛋白不僅是細(xì)胞骨架的主要組成部分，而且還構(gòu)成了肌細(xì)胞中具有收縮功能的組織。肌動蛋白對于細(xì)胞活動起到很大的作用，比如細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和分裂，原生質(zhì)體的流動，動物胞囊和器官的運動，細(xì)胞間信息的傳遞，以及細(xì)胞的形態(tài)的建立等(Sellers?JR.Fifty?years?of?contractility?research?post?sliding?filament?hypothesis[J].Journal?of?muscle?research?and?cell?motility，2004，25(6)：475-482；Winograd-Katz?SE，Brunner?MC，Mirlas?N，Geiger?B.Analysis?of?the?signaling?pathways?regulating?Src-dependent?remodeling?of?the?actin?cytoskeleton[J].European?journal?of?cell?biology，2011，90(2-3)：143-156.)。Actin不僅存在于細(xì)胞質(zhì)中，而且越來越多的證據(jù)表明Actin在細(xì)胞核中也具有重要的作用(Primal?de?Lanerolle，Leonid?Serebryannyy.Nuclear?actin?and?myosins：Life?without?filaments[J].Nature?cell?biology，2011，13(11)：1282-1288.)。除了線蟲類精子細(xì)胞，在所有的真核細(xì)胞當(dāng)中均發(fā)現(xiàn)有肌動蛋白存在。在生物分子演化過程中，肌動蛋白是被高度保留下來的蛋白質(zhì)分子之一，從藻類細(xì)胞到人體細(xì)胞肌動蛋白只有不到20％的變化(Berepiki?A，Lichius?A，Read?ND.Actin?organization?and?dynamics?in?filamentous?fungi[J].Nature?review?microbiology，2011，9(12)：876-87.)。Actin可以分為6種，β-actin和γ-non-muscle?actin?廣泛分布于各種組織中，其余4種具有不同肌肉組織特異性。β-actin在肌細(xì)胞中占總蛋白的10％，即使在非肌細(xì)胞中，肌動蛋白也占細(xì)胞總蛋白的1％～5％。β-actin在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白表達(dá)水平的變化時常用它來做參照物。?

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)試驗，利用原核重組表達(dá)技術(shù)，表達(dá)出的人β-actin蛋白主要以包涵體的形式存在，可溶于8M尿素。電洗脫純化后的人β-actin蛋白具有很高的純度，Western?blot實驗顯示該蛋白具有很強(qiáng)的免疫反應(yīng)性。純化后的人β-actin蛋白免疫BALB/c小鼠，通過雜交瘤技術(shù)，篩選到10株分泌抗人β-actin蛋白單?克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，對其中1株性質(zhì)優(yōu)良的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定。本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)良特性是現(xiàn)有技術(shù)中的雜交瘤細(xì)胞不可比擬的，對反應(yīng)的物種具有廣譜性，而對β-actin蛋白具有特異性，即對包括人、鼠、兔和魚的β-actin蛋白均具有優(yōu)良的反應(yīng)特異性。?

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種分泌抗人β-actin蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，其分泌的單克隆抗體可以廣泛的應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)試驗，具有良好的應(yīng)用價值。?

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種分泌抗人β-actin蛋白單克隆抗體（McAb）的雜交瘤細(xì)胞，其是保藏號為CGMCC?5908的雜交瘤細(xì)胞，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。?

該雜交瘤細(xì)胞已于2012年3月13日為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC所保藏（保藏地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號），其保藏號為CGMCC?5908，經(jīng)檢測存活。該細(xì)胞是圓形的半貼壁細(xì)胞（用彎管可以將細(xì)胞從瓶壁上吹下來，收集細(xì)胞不需要胰酶消化，如果有細(xì)胞懸浮存在也是正常），細(xì)胞分裂倍增的時間是16-18小時。?

同時，本發(fā)明還提供所述雜交瘤細(xì)胞的制備方法，其步驟如下：?