[發明專利]一種酵母菌落PCR菌體前處理的方法無效
| 申請號： | 201210106892.4 | 申請日： | 2012-04-12 |
| 公開（公告）號： | CN103374604A | 公開（公告）日： | 2013-10-30 |
| 發明（設計）人： | 趙宗保;林心萍;張素芳;朱志偉 | 申請（專利權）人： | 中國科學院大連化學物理研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12R1/645;C12R1/865 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 馬馳 |
| 地址： | 116023 *** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酵母 菌落 pcr 菌體 處理 方法 | ||
1.一種酵母菌落PCR菌體前處理的方法，其特征在于：
首先將酵母菌體懸浮于溶液中作為樣品，滅活處理，再先后加入不同的兩種酶處理，最后將樣品溶液煮沸，取上清直接作為PCR反應的模板；
先加入的所述酶為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、β-1，3-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶、α-1，4-葡聚糖酶中的一種；酶處理條件為溫度25℃～55℃，時間5min～2h，酶用量0.01U/107個細胞～5U/107個細胞；
后加入的所述酶為蛋白酶、蛋白酶K、磷脂酶、蝸牛酶、幾丁質酶中的一種；酶處理條件為溫度25℃～55℃，時間5min～2h，酶用量0.1U/107個細胞～4U/107個細胞。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的溶液為pH＝3～7的水、或醋酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽以及其他pH值范圍為3～7的緩沖液中的一種。
3.按照權利要求1所述方法，其特征在于：滅活處理是指樣品在酶處理之前，需要經過加熱至沸騰、微波輻射(800W)處理、超聲(400W，20kHz)處理中一種或它們中二種以上的必要組合進行滅活處理，處理時間為1min-2h。
4.按照權利要求1所述方法，其特征在于：樣品在酶處理之后，需要經過加熱滅活處理，，即樣品溶液煮沸處理，處理時間為5min-2h。
5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酵母菌體為子囊菌門或擔子菌門的酵母菌。
6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：樣品中酵母菌體的量為105-108個細胞。
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