[發明專利]一種提高M2型丙酮酸激酶免疫效果的蛋白制備方法

無效

• 申請號: 201210106866.1
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN103667321A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 鄒國源;陳琍;高文霞
• 申請（專利權）人: 上海鉑嵋生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/70;C12N9/12;C07K7/06;C07K16/40
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1.一種提高M2型丙酮酸激酶(PKM2)免疫效果的蛋白的制備方法，其特征在于：

(1)通過GST標簽連接PKM2特異序列多肽抗原，提高免疫效果。

(2)多種PKM2的多肽序列，偶聯至生物素，減少非特異性抗體結合，提高篩選效率。

(3)9個多肽中獨特的氨基酸序列，可以用于篩選不同表位的抗體。

2.如權利要求書1(1)所述，其特征在于將PKM2的獨特序列(IY?HLQLFEELRR?LAPITSDPTE?ATAVGAVEASFKCCSGAIIV?LTK)連接至帶有標簽谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)的pET24a載體上，通過GST標簽與PKM2特異序列的連接，增加免疫原的特異性及分子量，提高免疫效果。

3.如權利要求書1(2)所述，其特征在于將PKM2的多肽序列偶聯至生物素上，與固定有鏈唑霉素(strepavidin)的酶標板結合，由于多肽序列的片段較小，具有高特異性和親和力的抗體才能有較強的結合，因此可以減少非特異性抗體的結合，提高免疫效果。

4.如權利要求書1(3)所述，其特征在于合成PKM2的9個多肽的獨特氨基酸序列，序列如下：1)Biotin-IYHLQLFEEL，2)Biotin-RRLAPITSDP，3)Biotin-TE?ATAVGAVE，4)Biotin-ASFKCCSG，5)Biotin-AIIV?LTK，6)Biotin-LFEELRRLAP，7)Biotin-ITSDPTEATA，8)Biotin-VGAVEASFKC，9)Biotin-CSGAIIVLTK。這些具不同特異性的抗原，可用于篩選不同表位的抗體。