[發明專利]一種普洱茶發酵生產的質量控制方法

無效

• 申請號: 201210106635.0
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN103374603A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 李長文;李巍;梁慧珍;劉冰;張長霞;山其木格
• 申請（專利權）人: 云南天士力帝泊洱生物茶集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N27/447
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

1.一種普洱茶發酵過程中優勢菌群檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟1，建立普洱茶發酵過程中的優勢微生物DGGE標準圖譜；

步驟2，測定發酵過程中普洱茶優勢微生物DGGE圖譜；

步驟3，比較上述兩個圖譜。

2.根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，其中步驟1所述建立標準圖譜，步驟如下：

1)取普洱茶不同發酵階段的合格樣品；

2)提取微生物總DNA；

3)以總DNA為模板，在專用引物的引導下進行PCR擴增；

4)對PCR產物進行變性梯度凝膠電泳，sybrgreen?I染色后得到DGGE標準圖譜。

3.根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，其中步驟2所述測定圖譜，步驟如下：

1)取普洱茶不同發酵階段的樣品；

2)提取待測樣品的總DNA；

3)以待測樣品的總DNA為模板，在專用引物的引導下進行PCR擴增；

4)對目的片段進行變性梯度凝膠電泳，sybrgreen?I染色后得到DGGE圖譜。

4.根據權利要求2或3的檢測方法，其特征在于，其中1)所述不同發酵階段，分別為以下階段：入堆原料取樣、第一次翻堆取樣、第二次翻堆取樣、第三次翻堆取樣、出堆取樣，取樣得到的樣品分別提取其真菌的總DNA和細菌的總DNA，分別測定其DGGE圖譜，一次發酵生產過程，共得到5次樣品的DGGE圖譜。

5.根據權利要求2或3的檢測方法，其特征在于，其中2)所述提取總DNA，包括提取待測樣品中真菌的總DNA和細菌的總DNA。

6.根據權利要求2或3的檢測方法，其特征在于，其中真菌總DNA和細菌總DNA的提取方法是相同的，首先從樣品中分離出真菌和細菌，分別采用已知的提取方法提取其中的總DNA，分別得到真菌總DNA和細菌總DNA，將真菌總DNA和細菌總DNA分別進行PCR擴增，得到各自的DGGE圖譜。

7.根據權利要求2或3的檢測方法，其特征在于，其中3)所述PCR擴增屬于現有技術，在得到相應樣品的真菌總DNA和細菌總DNA后，根據現有技術進行PCR擴增，

其中所述的專用引物，對于真菌總DNA的PCR擴增，引物如下：

第一步擴增引物為GeoA2：5’-CCAGTAGTCATATGCTTGTCTC-3’和Geo11：5’-ACCTTGTTACGACTTTTACTTCC-3’

第二步擴增采用的引物為：NS31-GC：5’-CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGTTGGAGGGCAAGTCTGGTGCC-3’和Glol：5’-GCCTGCTTTAAACACTCTA-3’；

其中所述的專用引物，對于細菌總DNA的PCR擴增，引物如下：

第一步擴增采用的引物為16s1：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和16s2：5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’。

第二步擴增采用的引物為：338fGC：5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’和R518：5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’。

8.根據權利要求2或3的檢測方法，其特征在于，所述4)中所述目的片段是真菌擴增引物和細菌擴增引物進行PCR擴增獲得的目的片段。

9.根據權利要求1的檢測方法，其特征在于，所述DGGE標準圖譜，是對產品合格的普洱茶生產過程中不同發酵階段的樣品進行測定得到的真菌和細菌的DGGE譜圖，通過比較生產過程樣品的真菌和細菌的PCR-DGGE譜圖以及標準譜圖，可以準確的確定每批產品的每個階段結果是否一致，同時可以據此確定產品是否合格。