[發(fā)明專利]一種同時鑒別食品中四種肉類成分的多重PCR方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210099651.1 | 申請日： | 2012-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN102605090A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張馳;楊軍;周駿貴;何瑋玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京知識律師事務(wù)所 32207 | 代理人： | 胡錫瑜 |
| 地址： | 210028 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同時 鑒別 食品 中四種 肉類 成分 多重 pcr 方法 | ||
1.一種同時快速鑒別食品中豬、牛、羊、雞四種肉類成分的通用引物多重PCR方法，其特征是由以下步驟構(gòu)成：
??（1）使用DNeasy?組織細(xì)胞DNA提取試劑盒提取基因組總DNA；
??（2）基于動物線粒體細(xì)胞色素b基因的差異性位點，采用正向引物共用、反向特異性引物的策略設(shè)計5條通用引物多重PCR引物，建立并優(yōu)化多重PCR反應(yīng)體系，通過電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物分子量差異實現(xiàn)4種肉類的快速同時鑒別，多重PCR的反應(yīng)體系為：PCR反應(yīng)50μL體系：反應(yīng)緩沖液（10×）5μL，dNTP（2.5mmol/L）4μL，MgCl2（2.5mmol/L）3μL，Taq酶0.5μL，正向引物與4條反向引物（10μmol/L）各1μL，模板2μL，反應(yīng)條件為94℃3min，30個循環(huán)的94℃、30s，52℃、30s，72℃、45s，72℃、7min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述同時快速鑒別食品中豬、牛、羊、雞四種肉類成分的通用引物多重PCR方法，其特征在于正向引物序列為5’-CCCATCAAACATCTCATCTTGATGAAA-3’，反向特異性引物序列分別為：雞5’-AAGATACAGATGAAGAAGAATGAGGCG-3’，牛5’-CTAGAAAAGTGTAAGACCCGTAATATAA-3’，羊5’-GCCTATGAATGCTGTGGCTATTGTCGC-3’，豬5’-GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCGTA-3’，雞、牛、羊、豬的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物片段分別為216bp、263bp、320bp和387bp。
3.權(quán)利要求1所述的同時快速檢測食品中豬、牛、羊、雞四種肉類成分的通用引物多重PCR方法在食品質(zhì)量控制和質(zhì)量安全檢測中的應(yīng)用。
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