[發(fā)明專利]一種普魯蘭多糖的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210098720.7
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102621269A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王秀云;肖佳普
• 申請（專利權(quán)）人: 華遠醫(yī)藥研究院有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種普魯蘭多糖的定性和定量的簡便檢測方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

短梗霉多糖(pullulan)，中文譯為普魯蘭，也叫普魯蘭多糖、茁霉多糖、普聚多糖或茁霉糖，普魯蘭多糖是以淀粉為原料，通過黑酵母菌的一種出芽短梗霉發(fā)酵所產(chǎn)生的胞外多糖，是無味無嗅的白色粉末。其化學組成主要是由α-1.4葡萄糖苷鍵連接的聚麥芽三糖，分子結(jié)構(gòu)中含1/3的α-1.6葡萄糖苷鍵，2/3的α-1.4葡萄糖苷鍵。該多糖易溶于水，安全無毒、可食用、低熱值、耐酸堿、可塑性好、成膜性好、簿膜隔氣性佳。因其在自然界可被微生物降解利用，不會引起環(huán)境污染，故被譽為無公害塑料。

目前普魯蘭多糖的研究集中在發(fā)酵菌種的選育、發(fā)酵過程優(yōu)化和發(fā)酵液提取方面的研究，普魯蘭多糖的檢測方法也多研究對于發(fā)酵液中多糖含量的測定，鮮有對于普魯蘭多糖產(chǎn)品的檢測方法報道。

本發(fā)明提供一種簡便的普魯蘭多糖的定性和定量的檢測方法，相對于現(xiàn)有的常規(guī)多糖檢測方法，具有以下的創(chuàng)新性：

1、本發(fā)明在對于普魯蘭多糖定性檢測中，根據(jù)普魯蘭酶的專一性，和普魯蘭多糖是由多個麥芽三糖組成的性質(zhì)，采用薄層色譜法，對普魯蘭多糖的酶水解液、麥芽三糖以及普魯蘭多糖進行薄層色譜對比，從而對普魯蘭多糖進行定性。本發(fā)明方法操作簡便，所使用儀器簡單，鑒定時間小于0.5h。

2、本發(fā)明在對于普魯蘭多糖定量檢測中，采用的蒽酮-硫酸法較之現(xiàn)有常用的苯酚-硫酸法具有更高的精密性，且本方法不僅試用與普魯蘭多糖產(chǎn)品的檢測，同樣適用于發(fā)酵過程中發(fā)酵液中普魯蘭多糖含量的測定，所用儀器簡單，操作簡便。

本發(fā)明的具體步驟如下：

(1)定性檢驗步驟如下：

取普魯蘭酶溶于檸檬酸-磷酸二氫鈉緩沖液中，將酶液平均分為2份，加入普魯蘭多糖標準品、樣品Y，在培養(yǎng)箱中保溫酶解，將酶解液、標準麥芽三糖和普魯蘭多糖溶液為對照在硅膠薄板展層，展層完畢后將顯色劑噴于硅膠板上，加熱顯色，若樣品溶液與普魯蘭多糖標準品溶液在薄層層析圖譜中顯色在同一水平位子上且樣品酶解液、普魯蘭多糖標準品酶解液和標準麥芽三糖溶液在薄層層析圖譜中顯色在同一水平位子上，其他位子并無顯色的，即可證明樣品即為普魯蘭多糖

(2)定量檢測步驟如下：

蒽酮-硫酸試劑的制備：精密稱取蒽酮200mg于100mL容量瓶中，加入濃硫酸直至蒽酮完全溶解完，再加入濃硫酸定容至刻度。

對照品溶液的制備：精密稱取85℃干燥至恒重的普魯蘭多糖標準品，配制成0.1mg/mL的普魯蘭多糖標準溶液。

標準曲線的制作：精密量取對照品溶液0、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL置于含塞試管中，蒸餾水補至1.0mL，分別加入蒽酮-硫酸試劑4.0mL，充分搖勻后置于85℃水浴中顯色，充分顯色后，于550nm波長處測定各濃度溶液的吸光度，以標準葡萄糖含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，計算出標準曲線回歸方程。

樣品普魯蘭多糖含量的測定：精密稱取普魯蘭多糖樣品，添加蒸餾水配制成樣品C₁mg/mL溶液，精密量取樣品溶液Y?mL，置于含塞試管中，蒸餾水補至1.0mL，加入蒽酮-硫酸試劑4.0mL，充分搖勻后置于85℃水浴中顯色，充分顯色后，于550nm波長處測定各濃度溶液的吸光度A₁，將A₁帶入標準曲線回歸方程，得到其相對應的標準品量C₂，普魯蘭多糖樣品的純度P計算公式如下：

P=C1×YC2×0.1×100%.]]>

說明書附圖

圖1實施例中蒽酮-硫酸法普魯蘭多糖標準曲線。

具體實施例

下面通過實施例對本發(fā)明做進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，所用術(shù)語從事生物技術(shù)行業(yè)的技術(shù)人員均能讀懂。

實施例1

(1)定性檢驗：