[發(fā)明專利]一種檢測黃病毒屬病毒的CODEHOP RT-PCR試劑及方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210097111.X | 申請日： | 2012-04-05 |
| 公開（公告）號： | CN102643930A | 公開（公告）日： | 2012-08-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡群;馬思杰;孫肖紅;鄭劍寧;韓輝;倪紅霞 | 申請（專利權(quán)）人： | 中華人民共和國大榭出入境檢驗(yàn)檢疫局 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程曉明 |
| 地址： | 315812 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 病毒 codehop rt pcr 試劑 方法 | ||
1.一種檢測黃病毒屬病毒的CODEHOP?RT-PCR試劑，包括上游引物溶液和下游引物溶液，其特征在于所述上游引物溶液含有核苷酸序列為AATGTATGCA?GATGATACAG?Caggntggga?yac的引物B1，所述下游引物溶液含有核苷酸序列為TCTATCATCA?ATTGGTTTAA?CAACAcartc?rtcncc的引物B2；其中r為嘌呤，可以是g或a，y為嘧啶，可以是c或t/u，n是任何堿基，可以是g或a或c或t/u或其它。
2.利用權(quán)利要求1所述一種檢測黃病毒屬病毒的CODEHOP?RT-PCR試劑檢測黃病毒屬病毒的方法，其特征在于步驟如下：
a、RNA提取：用RNA提取試劑盒提取病毒的RNA，得到RNA，具體提取方法依說明書進(jìn)行；?
b、RNA逆轉(zhuǎn)錄：用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對上述RNA進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，得到PCR模板，具體逆轉(zhuǎn)錄方法依說明書進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物即為后續(xù)的PCR模板；
c、PCR反應(yīng)：在0.2mL?eppendorf管中加入10×PCR?緩沖液?2.5μL、濃度為25mM的MgCl2溶液1.5μL、濃度為10mM的dNTP液0.5μL、濃度為5U/μL的Taq酶液?0.5μL、濃度為25μM上游引物溶液1μL、濃度為25μM下游引物溶液1μL，上述PCR模板2μL，滅菌去離子水16μL組成的反應(yīng)體系；反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃?延伸1min，45個循環(huán)，72℃延伸7min，4℃保存PCR產(chǎn)物，其中上游引物溶液含有核苷酸序列為AATGTATGCA?GATGATACAG?Caggntggga?yac的引物B1，下游引物溶液含有核苷酸序列為TCTATCATCA?ATTGGTTTAA?CAACAcartc?rtcncc的引物B2；?
d、瓊脂糖凝膠電泳：將上述PCR產(chǎn)物用重量百分濃度1-1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測目標(biāo)條帶，電泳條件電壓100v，30min，將電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)分析，若結(jié)果出現(xiàn)421~445bp大小片段的條帶，則為黃熱屬病毒。
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