[發明專利]豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒及其制備方法和其應用

無效

• 申請號: 201210095915.6
• 申請日: 2012-04-01
• 公開（公告）號: CN103364552A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 廖園園;漆世華;李建;秦偉;張萍;謝紅玲;溫文生
• 申請（專利權）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京智匯東方知識產權代理事務所(普通合伙) 11391
• 代理人: 康正德;范曉斌

1.一種豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述檢測試劑盒含有：包被豬IgM單克隆抗體的酶標板、封閉液、樣品稀釋液、檢測用抗原、酶結合物、濃縮洗滌液、酶底物A溶液、酶底物B溶液和終止液，其中，所述檢測用抗原為純化的豬細小病毒，所述的酶結合物為辣根過氧化物酶-抗PPV抗體酶結合物。

2.根據權利要求1所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述的包被豬IgM單克隆抗體的酶標板孔包被豬IgM單克隆抗體的包被量為0.1μg-1μg/孔，包被稀釋液為0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，其中，所述碳酸鹽緩沖液的pH9.6。

3.根據權利要求2所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述碳酸鹽緩沖液的組成為，每升碳酸鹽緩沖溶液中含有1.59g?Na₂CO₃和2.93g?NaHCO₃。

4.根據權利要求1-3任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述封閉液選自質量濃度為1-10％的BSA、質量濃度為1-10％的脫脂牛奶的任一種或其組合。

5.根據權利要求1-3任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述樣品稀釋液由質量濃度為0.1-10％牛血清白蛋白和含有0.01-0.05％NaN₃的磷酸鹽緩沖液組成，其中，所述磷酸鹽緩沖溶液的濃度為0.01mol/L，pH7.2-7.4。

6.根據權利要求1-3任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述濃縮洗滌液為含有0.5v/v％吐溫-20的磷酸鹽緩沖溶液，其中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.1mol/L，pH7.2-7.4。

7.根據權利要求1-3任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述的酶底物A溶液為1％的3，3’-5，5’-四甲基聯苯胺溶液；所述的酶底物B溶液為含有0.012％雙氧水的乙酸鈉緩沖溶液，其中，乙酸鈉緩沖溶液的濃度為1％，pH5.0。

8.根據權利要求1-3任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述終止液為1mol/L?H₂SO₄溶液。

9.根據權利要求1-8任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒中還含有陽性對照液和陰性對照液，其中，所述的陽性對照液用樣品稀釋液100倍稀釋抗PPV?IgM抗體的豬陽性血清配制而成；所述的陰性對照液用樣品稀釋液100倍稀釋不含有抗PPV?IgM抗體的豬陰性血清配制而成。

10.根據權利要求1-9任一項所述的豬細小病毒IgM抗體ELISA檢測試劑盒，所述純化的PPV抗原的制備方法為：用PPV?CP-99株在豬細小病毒毒株敏感的細胞上培養、擴增，經凍融，超聲波破碎后，離心去沉淀，上清超濾濃縮，經超速離心和CsCl密度梯度離心后獲得，，-40℃保存，作為包被用PPV抗原，其中，所述豬細小病毒毒株敏感的細胞選自IBRS-2、PK-15、ST細胞的任一種或其組合。