[發明專利]一種檢測甲型副傷寒沙門菌的RT-LAMP試劑盒

有效

• 申請號: 201210093342.3
• 申請日: 2012-03-31
• 公開（公告）號: CN102643901A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 閆梅英;樊粉霞;闞飆
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種用于檢測甲型副傷寒沙門菌(S.Paratyphi?A)的靶序列，其具有SEQ?ID?NO.7所示的序列或其特異性片段。

2.用于擴增權利要求2所述靶序列的特異性引物組合。

3.如權利要求2所述的引物組合，其為特異性RT-LAMP引物組，包括以下6條引物：

F3：5’-CCTGTTAGAAGTGTTTACAACTT-3’；

B3：5’-GCTAAACCACCAAATTGTGT-3’；

FIP：5’-CCAATAGAAATCCTCGGCCAG-

CCGAGTTTTGATAAGGATGATTG-3’；

BIP：5’-AACCCTTCAAAACTACCAAGTCC-

GAATCTTTAACACGCAACTTTC-3’；

LF：5’-TGAGGTTGGATTCCAT-3’；

LB：5’-ATTGAGTGGGTTAACAAA-3’。

4.權利要求3所述的引物組合在制備甲型副傷寒沙門菌的檢測試劑盒或檢測試劑中的應用。

5.一種含有權利要求3所述引物組合的檢測試劑。

6.一種含有權利要求3所述引物組合的甲型副傷寒沙門菌的RT-LAMP檢測試劑盒。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包含RT-LAMP反應液，與RT-LAMP引物共同構成LAMP檢測體系；25μL?RT-LAMP檢測體系的具體配置為：10μM的F3、B3各0.25μL；10μM的FIP、BIP各2μL；10μM的LF、LB各1μL；2×反應混合buffer12.5μL，其含40mM?Tris-HCl，pH?8.8，20mM?KCl，16mM?MgSO₄，20mM(NH₄)₂SO₄，0.2％Tween20，1.6M甜菜堿和2.8mM?dNTPs，1μl的BstDNA聚合酶和AMV逆轉錄酶混合物，5μL的模板RNA。

8.一種檢測甲型副傷寒沙門菌(S.Paratyphi?A)的方法，其特征在于，用權利要求3所述的引物組進行RT-LAMP反應，將比濁度≥0.1的擴增結果判定為RT-LAMP反應陽性。

9.如權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，RT-LAMP反應條件為：65℃恒溫1h。