[發(fā)明專利]鏈霉菌、抗腫瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210087537.7
• 申請(qǐng)日: 2012-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN102643765B
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張長(zhǎng)生;張文軍;田新朋;李蘇梅;張慶波;馬亮;張海波;張偲;鞠建華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C07D487/20;A61K31/407;A61P35/02;A61P35/00;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于工業(yè)微生物領(lǐng)域，具體涉及一種能夠產(chǎn)生多種抗腫瘤化合物的新的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032，以及該菌生產(chǎn)的抗腫瘤化合物Spiro-Indimycin?A-D及其制備方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)：

近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)新型海洋放線菌資源，并從中篩選新型的活性次生代謝產(chǎn)物成為國(guó)際上海洋微生物研究的重要方向。從海洋放線菌中尋找結(jié)構(gòu)新穎、高效、低毒的代謝產(chǎn)物逐漸成為藥物尋找的新源泉。?

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種新的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032，該菌于2011年7月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址：中國(guó)武漢市武漢大學(xué)，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?2011258。?

本發(fā)明的新的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032是從印度洋(E?87°59.7′，N?9°59.3′)水深3412米的海底沉積物中分離獲得的。?

1、形態(tài)學(xué)特征和生理生化分析?

鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032屬于革蘭氏陽(yáng)性，好氧放線菌，基絲微黃分枝，氣絲灰白色分支并分化成卷曲的孢子鏈；孢子橢球狀(圖2)，長(zhǎng)0.4-0.7μm，表面光滑。在PDA培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)較弱，在ISP5上生長(zhǎng)有可溶性色素產(chǎn)生。接觸酶、脲酶、牛奶凝固和胴化反應(yīng)陽(yáng)性，明膠液化、黑色素產(chǎn)生和氧化酶反應(yīng)陰性。能水解淀粉、纖維素、吐溫20，40，?80；H₂S產(chǎn)生和硝酸鹽還原反應(yīng)陰性；可以利用D-阿拉伯糖，D-纖維二糖，果糖，肌醇，丙酮酸鈉，D-棉子糖，L-鼠李糖，D-甘露醇，D-葡萄糖，D-山梨糖和木糖醇，為唯一碳源和能源生長(zhǎng)。而不能利用D-半乳糖，D-乳糖，D-甘露糖，D-核糖，D-海藻糖和D-木糖；對(duì)甲氧嘧啶和林可霉素敏感。pH、鹽濃度和溫度的耐受范圍分別為pH?6.0-9.0，0-9％和15-40℃。細(xì)胞壁含有L-DAP。優(yōu)勢(shì)醌為MK-9(H6)和MK-11；主要脂肪酸為i-C_15:0(8％)，i-C_16:0(24％)，i-C_16:1G(14％)，ai-C_17:0(15％)和ai-C_17:1A(12％)。G+C摩爾含量為71.6(±0.5)％。?

2、分子生物學(xué)鑒定?

常規(guī)PCR擴(kuò)增菌株SCSIO?03032的16S?rDNA并測(cè)序，其序列如SEQ?ID?NO.1所示，而后提交到GenBank中，對(duì)16S?rDNA核苷酸序列進(jìn)行BLAST分析，結(jié)果顯示，該菌株與Streptomyces?specialis?GW41-1564^T的相似度為97％，重新構(gòu)建該屬系統(tǒng)發(fā)育樹顯示菌株SCSIO?03032聚在該類群，說(shuō)明該菌株SCSIO?03032為鏈霉菌屬。如圖1所示，通過鄰接法清晰地揭示了該菌株與一組鏈霉菌屬物種的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，表明該菌屬于鏈霉菌屬的一種。?

根據(jù)以上形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、化學(xué)等分析，其與已知最接近的菌株與Streptomyces?specialis?GW41-1564^T有較大的差異，且基因組雜交顯示其雜交值為23％，遠(yuǎn)低于種內(nèi)差異標(biāo)準(zhǔn)的70％(Stackebrandt，E.&?Ebers，J.Taxonomic?parameters?revisited：tarnished?gold?standards.Microbiol?Today.(2006).33，152-155.)；因此，綜合分析多項(xiàng)分類數(shù)據(jù)，鑒定此菌株為鏈霉菌屬(Streptomyces)的一個(gè)新種，命名為：鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032，該菌于2011年7月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址：中國(guó)武漢市武漢大學(xué)，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?2011258。?

本發(fā)明的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)SCSIO?03032能夠產(chǎn)生4種具有新穎結(jié)構(gòu)的抗腫瘤化?合物Spiro-Indimycin?A-D。?

因此本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供化合物Spiro-Indimycin?A-D，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示：?