[發(fā)明專利]口腔癌易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210086723.9
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102605081A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 潘加奎;姜麗
• 申請（專利權(quán)）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學領(lǐng)域，涉及醫(yī)學和生物技術(shù)，具體涉及一種口腔癌易感基因檢測試劑盒，根據(jù)檢測結(jié)果從基因?qū)用嬖u估口腔癌發(fā)病的風險級別，并作為預防和治療口腔癌的方向指導。

背景技術(shù)

口腔癌是發(fā)生在口腔的惡性腫瘤的總稱，大部分屬于鱗狀上皮細胞癌。在臨床實踐中口腔癌包括唇癌、牙齦癌、舌癌、軟硬腭癌、頜骨癌、口底癌、口咽癌、涎腺癌和上頜竇癌以及發(fā)生于顏面部皮膚粘膜的癌癥等。口腔癌是頭頸部較常見的惡性腫瘤之一。

口腔癌在全世界是居第六位的常見腫瘤，并且男性的發(fā)生率較女性高1至5倍。在發(fā)展中國家，口腔癌是一大問題。口腔癌的發(fā)生率與年齡的增加有關(guān)。40歲后發(fā)生率急劇上升。隨著世界老齡人口的增加，將有更多的老年人處于口腔癌的高度危險之中。其危險隨年齡增長急劇上升，由30歲男性的7/10萬升至60歲時80/10萬。

口腔癌發(fā)生初期，往往無痛苦，不易引起患者的重視，或者患者雖然發(fā)現(xiàn)一些異常但希望其能自行消失。口腔癌最好的治療方法莫過于手術(shù)切除。但一般當口腔癌被確診時，往往錯過了最佳手術(shù)時機。此時即使可以手術(shù)，也會因為手術(shù)面積大而對口腔造成損害，不能恢復正常的功能與形態(tài)。因此，早期發(fā)現(xiàn)及預防就成為了治療口腔癌的重要前提。通過大量的研究證明，CYP1A1基因上Ile462Val位點多態(tài)性及MspI位點多態(tài)性，CYP2D6基因上C188T位點多態(tài)性的3個單核苷酸多態(tài)性與口腔癌的發(fā)生密切相關(guān)。

CYP1A1基因編碼細胞色素P4501A1。該蛋白是重要的活化多環(huán)芳烴類致癌物的主要酶類。被激活的CYP1A1能夠?qū)⒍喾N環(huán)境中的有機物質(zhì)如多環(huán)芳烴轉(zhuǎn)化為細胞毒素或其他致癌物質(zhì)，從而更加造成癌癥發(fā)生的危險。分子生物學研究表明，CYP1A1第462號氨基酸由Ile變?yōu)閂al，以及CYP1A1?MSPI位點T→C，會增加CYP1A1酶活性，可產(chǎn)生高誘導活性的CYP1A1酶，使多環(huán)芳烴類化合物活化速率加快，導致多種癌癥的發(fā)生風險增高。國內(nèi)外研究表明CYP1A1基因多態(tài)性與口腔癌發(fā)生密切相關(guān)，大樣本的中國人群的關(guān)聯(lián)分析顯示，該位點的多態(tài)現(xiàn)象是中國人群中重要的口腔癌遺傳易感因素之一。因此該位點可以作為肺癌易感性的遺傳檢測因子。

CYP2D6酶又稱為異喹胍羥化酶，主要是因為異喹胍代謝僅依賴于CYP2D6。CYP2D6表型和基因型有顯著的種族差異，亞洲人常見的單核苷酸多態(tài)性之一是CYP2D6第一號外顯子C188T突變，造成Pro34Ser氨基酸替代，導致編碼的酶活性改變，影響對前致癌物的代謝，與個體的口腔癌易感性有密切關(guān)系。

綜上所述，鑒于CYP1A1基因上Ile462Val位點多態(tài)性及MspI位點多態(tài)性，CYP2D6基因上C188T位點多態(tài)性在口腔癌變過程中有著不可忽視的作用，可以將上述基因作為遺傳易感因素來檢測出受檢者在口腔癌發(fā)生相關(guān)的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患口腔癌的高危人群，從而有針對性的預防和治療口腔癌，這對于降低口腔癌的發(fā)病率有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于CYP1A1基因上Ile462Val位點多態(tài)性及MspI位點多態(tài)性，CYP2D6基因上C188T位點多態(tài)性的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型可作為評估口腔癌發(fā)病的危險因子的基礎上，本發(fā)明提供一種口腔癌易感基因檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測CYP1A1基因上Ile462Val位點多態(tài)性及MspI位點多態(tài)性，CYP2D6基因上C188T位點多態(tài)性的3個單核苷酸多態(tài)性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件(包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等)；

PCR產(chǎn)物純化組件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA測序反應組件(包括BigDye?mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對(每條引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR產(chǎn)物純化體系：1U/ul?SAP酶0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。