[發明專利]一種提高低再生力小麥基因型幼胚組織培養再生率的方法

有效

• 申請號: 201210085450.6
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102599059A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 葉興國;王軻;殷桂香;杜麗璞;李欣;林志珊;徐惠君;王新敏;周曉鴻;張偉;肖樂樂
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種提高低再生力小麥基因型幼胚組織培養再生率的方法。

背景技術

小麥組織離體培養高頻率植株再生是開展小麥細胞工程育種和轉基因育種的重要環節之一。目前為止，培養小麥幼胚、幼穗、花藥、成熟胚、小孢子等外植體材料先后獲得了再生植株，其中，小麥幼胚被認為是再生率最高的外植體類型。但是，小麥幼胚培養在不同基因型之間存在顯著差異，能夠高頻率獲得再生植株的基因型非常有限，尤其是一些大面積推廣的優良小麥品種，其幼胚的再生能力往往都很低。大面積推廣優良小麥品種的適應性、豐產性和抗病性等已滿足生態條件和生產發展的需要，改良它們的個別缺點后即可在生產上較長時間種植，因而是細胞工程育種和轉基因育種的首選起始材料。研究表明，改良培養基(如SD2培養基)和培養程序(如生長素間歇處理)等技術策略可以提高具有中等以上培養力小麥品種幼胚的再生率，但對弱再生力小麥品種幼胚培養的效果不顯著。因此，研究用于提高弱再生力小麥品種幼胚組織培養再生率的培養方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種提高低再生力小麥幼胚組織培養再生率的方法。

本發明所提供的提高低再生力小麥幼胚組織培養再生率的方法，通過對高、低再生力小麥品種幼胚間隔接種進行愈傷組織誘導培養和對小麥愈傷組織間隔接種進行分化培養這兩個步驟來提高低再生力小麥幼胚組織培養的再生率，所述方法包括如下步驟：

1)將高再生力小麥品種的幼胚和低再生力小麥品種的幼胚按行間隔接種于裝有愈傷組織誘導培養基的同一個容器中，在黑暗條件下進行誘導培養，得到高再生力小麥品種愈傷組織和低再生力小麥品種愈傷組織；

2)將步驟1)得到的低再生力小麥品種愈傷組織和高再生力小麥品種愈傷組織按行間隔轉移到裝有分化培養基的同一個培養容器中，即仍然保持步驟1)的間隔接種方式，在光照條件下進行分化培養，得到低再生力小麥品種再生植株和高再生力小麥品種再生植株。

該方法對低再生力小麥幼胚組織培養的再生率高于對所述低再生力小麥幼胚進行單獨組織培養的再生率。對所述低再生力小麥幼胚進行單獨組織培養的方法除了接種方式是單獨接種(裝有愈傷組織誘導培養基的培養容器內只接種所述低再生力小麥幼胚，并且裝有分化培養基的培養容器內只接種所述低再生力小麥品種胚性愈傷組織)外，其它培養條件均與本發明的方法相同。

所述高再生力小麥品種具體可為新春9號或科農199，所述低再生力小麥品種具體可為中國春。

本發明的上述方法中，所述步驟1)和2)的同一個培養容器中，接種所述高再生力小麥品種的幼胚或愈傷組織的行數和接種所述低再生力小麥品種的幼胚或愈傷組織的行數最好相同，如同一個培養容器中，所述高再生力小麥品種和所述低再生力小麥品種的行數均為3行，其按行間隔接種方式可為第1、3和5行接種所述低再生力小麥品種，第2、4和6行接種所述高再生力小麥品種(圖1)。

本發明的上述方法中，所述步驟1)的同一個培養容器中，接種的所述高再生力小麥品種的幼胚的個數具體可為所述低再生力小麥品種的幼胚的個數的1-1.14倍。在本發明的一個實施例中，所述高再生力小麥品種為新春9號，所述低再生力小麥品種為中國春，接種的新春9號的幼胚個數是中國春幼胚個數的1-1.01倍；在本發明的另一個實施例中，所述高再生力小麥品種為科農199，所述低再生力小麥品種為中國春，接種的科農199的幼胚個數是中國春幼胚個數的1.13-1.14倍；所述步驟2)的同一個培養容器中，接種的所述高再生力小麥品種的愈傷組織的個數是所述低再生力小麥品種的愈傷組織的個數的0.85-1.21倍。在本發明的一個實施例中，所述高再生力小麥品種為新春9號，所述低再生力小麥品種為中國春，接種的新春9號的愈傷組織個數是中國春愈傷組織個數的0.85-1.10倍；在本發明的另一個實施例中，所述高再生力小麥品種為科農199，所述低再生力小麥品種為中國春，接種的科農199的愈傷組織個數是中國春愈傷組織個數的1.12-1.21倍。

本發明的上述方法中，所述步驟1)中的按行間隔接種的行距(相鄰兩行中心線的垂直距離)可為0.9-1.1cm，幼胚距(樣距)(每行中相鄰兩個幼胚中心之間的距離)可為0.5-0.7cm；所述步驟2)中的按行間隔接種的行距(相鄰兩行中心線的垂直距離)可為0.9-1.1cm，愈傷組織距(樣距)(每行中相鄰兩個愈傷組織中心之間的距離)可為0.5-0.7cm。