[發明專利]胃幽門螺旋桿菌乳膠法檢測試劑盒及其制備工藝

有效

• 申請號: 201210082601.2
• 申請日: 2012-03-26
• 公開（公告）號: CN102636641A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 張國華
• 申請（專利權）人: 上海凱創生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種胃幽門螺旋桿菌乳膠法檢測試劑盒，包括試劑條，所述試劑條包括襯底、濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，所述濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于所述襯底上，其特征在于，所述致敏乳膠聚酯膜上包被有彩色乳膠顆粒標記的抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I，免疫硝酸纖維素膜上設有包被了抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體II的檢測線和包被了羊抗兔IgG的質控線。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述彩色乳膠顆粒為粒徑280～310nm的聚苯乙烯顆粒。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I是以融合蛋白Ure-BA為抗原物質，免疫動物制備獲得的多克隆抗體，所述融合蛋白Ure-BA序列見SEQ?ID?NO：5。

4.權利要求1-3任一權利要求所述的胃幽門螺旋桿菌乳膠法檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1)致敏乳膠顆粒的制備：用羧基化的聚苯乙烯標記抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I，獲得致敏乳膠顆粒；

2)致敏乳膠聚酯膜的制備：用步驟1)獲得的致敏乳膠顆粒包被聚酯膜，獲得致敏乳膠聚酯膜；

3)將抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體II和羊抗兔抗體分別噴在硝酸纖維素膜檢測線和質控線的位置上，烘干備用，制得免疫硝酸纖維素膜；

4)將濾樣紙、致敏乳膠聚酯膜、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在PVC片上，切裁制得試劑條；

5)將試劑條裝入塑料盒，獲得胃幽門螺旋桿菌乳膠法檢測試劑盒。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1)致敏乳膠顆粒的制備為：

a.取一定體積的羧基化的聚苯乙烯，用2～3倍體積20mM?pH?6.0的碳酸緩沖溶液多次沖洗、離心、棄上清，獲得羧基化的聚苯乙烯顆粒沉淀；

b.用1～1.5倍體積20mM?pH6.0的磷酸緩沖溶液懸浮上一步獲得的羧基化的聚苯乙烯顆粒沉淀，并加入1～1.5倍體積的水溶性炭化二亞胺，室溫下攪拌15～40分鐘，最后用2～3倍體積0.01M?pH?8.0的硼酸緩沖溶液多次沖洗、離心、棄上清，獲得待標記物；

c.向步驟b獲得的所述待標記物中加入2～3倍體積0.2M?pH?7.0的硼酸緩沖液制成乳膠懸液，并向所述乳膠懸液中加入抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I；

d.充分反應過夜，加入終止劑終止反應，獲得致敏乳膠顆粒。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a中碳酸緩沖溶液為20mM?pH?6.0含0.01％SDS的碳酸緩沖溶液。

7.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a中羧基化的聚苯乙烯濃度為5～15w/v％，所述步驟b中水溶性炭化二亞胺的濃度為8～12mg/ml。

8.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟c中的抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I是以融合蛋白Ure-BA為抗原物質，免疫動物制備獲得的多克隆抗體，所述融合蛋白Ure-BA序列見SEQ?ID?NO：5。

9.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟c乳膠懸液中羧基化的聚苯乙烯顆粒偶聯抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I的量為：0.5mg抗胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體I/10mg聚苯乙烯顆粒。

10.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中致敏乳膠聚酯膜的制備具體步驟為：

A.用乳膠緩沖液稀釋致敏乳膠顆粒，獲得0.2～0.6w/v％的致敏乳膠溶液；

B.用步驟A制備好的致敏乳膠溶液噴涂聚酯膜，干燥，制得致敏乳膠聚酯膜。

11.如權利要求10所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A中的乳膠緩沖液配方如下：8～12v％?1.0M?Tris液，0.2～0.4w/v％聚乙二醇20000，0.15～0.25w/v％牛血清白蛋白，0.1～0.3w/v％脫脂牛奶，0.25～0.35w/v％酪蛋白，和0.02～0.08w/v％疊氮化鈉，用鹽酸調節pH至8.0±0.05，余量為水。

12.權利要求1-3任一權利要求所述的試劑盒在制備胃幽門螺旋桿菌檢測試劑中的應用。