[發明專利]一種分泌高中和活性犬瘟熱病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞1D7株

無效

• 申請號: 201210081170.8
• 申請日: 2012-03-26
• 公開（公告）號: CN102618503A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 王永山;畢振威;夏興霞;孫婧;范紅結;趙艷兵;溫海;秦海斌;張匯東
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14;C12R1/91
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

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技術領域

本發明涉及一種分泌高中和活性犬瘟熱病毒（CDV）單克隆抗體的雜交瘤細胞1D7株，屬于生物技術領域，涉及抗體工程技術。具體為高中和活性CDV單克隆抗體，對不同動物源的CDV毒株均具有高中和活性，可以用于犬、水貂和狐貍等多種犬瘟熱（CD）發病動物的臨床治療。?

背景技術

犬瘟熱（CD）是由犬瘟熱病毒（CDV）引起犬和肉食目中多種動物的一種高度接觸性傳染病，發病率幾乎可達100%，死亡率為80%以上。犬瘟熱在我國的發病率和致死率均有升高的趨勢，而且臨床表現也與以往有所不同。典型CD在臨床上以雙相熱、急性鼻卡他、支氣管炎、卡他性肺炎、嚴重的胃腸炎和神經癥狀為主要特征。近年來，在臨床上發現了大量CD病例，僅表現為一般呼吸道、消化道疾病的臨床癥狀，CDV檢測陽性，若不及時地進行CD特異性治療，死亡率很高，對這種CD病例，我們稱之為“?非典型CD”。?

該病呈世界性分布，敏感宿主廣泛且日益擴大。犬瘟熱是危害犬的最嚴重傳染病。不同年齡和品種的犬都可感染，尤其是幼齡犬。純種犬與當地土種犬相比，易感性明顯增高。在犬中首次發生犬瘟熱，死亡率可達90%。貂的犬瘟熱又稱貂瘟，是高度接觸性、傳播迅速的烈性傳染病，死亡率達98％以上。CDV在食肉目內及食肉目犬科、鼬科與鰭足目海豹科之間跨宿主傳播，是CD流行的重要因素。因此，犬瘟熱是養犬業、經濟動物養殖業危害最大的傳染病。?

CDV屬于副粘病毒科，麻疹病毒屬，病毒粒子呈圓形或橢圓形，有時也呈長絲狀，直徑為150～300nm。粒子中心含有寬徑約15～17nm螺旋形核衣殼，外面被覆一近似雙層輪廓的膜，膜上排列有1.3nm桿狀纖突。病毒的基因組為不分節段的負鏈RNA，全長15,616nt，從它的3′端到5′端依次為3′端前導序列、核衣殼蛋白基因（N）、磷蛋白基因（P）、基質蛋白基因（M）、融合蛋白基因（F）、附著或血凝蛋白基因（H）、大L蛋白基因（L）和5′端引導序列。P、N、L?為髓芯蛋白，與RNA轉錄和復制有關，N蛋白有包裹及保護內部基因的功能，P蛋白可能有聚合酶功能。M、F、H?為包被蛋白，位于N?蛋白的外側，H蛋白以近N末端的疏水區將其嵌在M?蛋白上，H蛋白是病毒侵襲宿主所必需，也是產生中和抗體的主要抗原之一。F蛋白是病毒表面的糖蛋白之一，介導病毒與感染細胞，感染細胞與非感染細胞間的融合，使病毒具有在宿主體內擴散的能力。F?蛋白首先以前體的形式被合成，只有經細胞的蛋白酶裂解成F1、F2形式，才具有融合活性。?

目前預防該病使用的疫苗多為弱毒苗，但是許多犬、水貂、狐等養殖場在應用弱毒疫苗后仍會發生本病。分析原因，與母源抗體、疫苗效價、使用方法以及病毒變異有關。?

在臨床上，CD發病動物采用抗體結合對癥治療的方法可以有效降低病死率。但是市場上現有的抗犬瘟熱病毒的高免血清多是來自于本源動物或異源動物，不僅抗體中和效價低，而且潛在著異源病毒傳播、過敏等風險。應用具有高中和活性的犬瘟熱病毒單克隆抗體治療CD，可以降低上述風險，提高療效。目前，有關分泌CDV單克隆抗體的雜交瘤細胞株已有報道，部分細胞株分泌的單克隆抗體對CDV具有中和活性，但中和效價低，對不同CDV毒株的中和活性至今未見報道。?

本發明從已免疫過Onderstepoort疫苗而發生非典型CD臨床癥狀的病犬組織中分離CDV強毒株，與Onderstepoort疫苗株存在著變異。以該病毒株為免疫原，運用淋巴細胞雜交瘤技建立了CDV特異單克隆抗體雜交瘤細胞庫，通過中和試驗篩選出了分泌高中和效價的單克隆抗體雜交瘤細胞，分泌的單克隆抗體對非典型CDV強毒株、Onderstepoort疫苗株、狐源CDV毒株和水貂源CDV毒株均具有相同的高中和活性（均達到10⁶），表明本發明的單克隆抗體不僅中和效價高而且抗CDV毒株范圍廣。將本發明的高中和活性單克隆抗體治療劑應用于犬、水貂或狐貍的犬瘟熱臨床治療，均具有顯著治療效果。?

發明內容

技術問題??

犬瘟熱是犬和肉食目中多種動物的一種高度接觸性傳染病，如果對發病動物不進行及時治療，死亡率達到80%以上。