[發明專利]一種直接檢測IL-6抗原的電化學免疫傳感器及應用

無效

• 申請號: 201210074963.7
• 申請日: 2012-03-20
• 公開（公告）號: CN102706939A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 王舜;陳錫安;金輝樂;楊婷
• 申請（專利權）人: 溫州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種直接檢測IL-6的電化學免疫傳感器，其特征在于所述傳感器按下述方法制備：(1)單壁碳納米管：以硅片或石英片為基底，以Fe/Mo納米粒子為催化劑，以乙醇作碳源，以氫氣作為碳源的載氣和保護氣，于石英管中1000℃下反應15min，獲得單壁碳納米管；所述Fe/Mo納米粒子中Fe和Mo物質的量之比為5∶1；(2)單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極：將單壁碳納米管用銅絲連接作為工作電極，以鉑作為對電極，以摩爾濃度0.1～10mM?HAuCl₄水溶液為電解液，在電壓為-0.1V～-0.5V下進行電化學沉積5～50s，獲得單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極；(3)單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極的修飾：將單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極浸泡在1～10mM的SHCH₂COOH水溶液中，室溫下浸泡3～10h，取出，用水清洗，得清洗后的電極置于EDC/NHS混合水溶液中，室溫下浸泡10～30min，取出用水清洗后，獲得修飾后的單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極；所述EDC/NHS混合水溶液為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺的混合水溶液；(4)電化學免疫傳感器：將步驟(3)獲得的修飾后的單壁碳納米管/金納米粒子雜化電極浸泡在10～100μg/ml的IL-6捕獲抗體的PBS緩沖液中，室溫下浸泡2～8h，取出，用Tween-20水溶液和PBS緩沖液交替清洗，獲得結合抗體的雜化電極，然后再將結合抗體的雜化電極浸泡在質量濃度1～5％牛血清蛋白的PBS緩沖液中，室溫下浸泡0.5～2h進行封閉，取出，用Tween-20水溶液和PBS緩沖液交替清洗，風干，獲得所述的電化學免疫傳感器。

2.如權利要求1所述的直接檢測IL-6的電化學免疫傳感器，其特征在于步驟(3)所述EDC/NHS混合水溶液為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺與水混合，使1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺終濃度為400mM，N-羥基琥珀酰亞胺終濃度為100mM。

3.如權利要求1所述的直接檢測IL-6的電化學免疫傳感器，其特征在于步驟(4)所述用Tween-20水溶液和PBS緩沖液交替清洗的方法為：用質量濃度0.01～0.05％Tween-20水溶液和pH7.0～7.3的PBS緩沖液交替清洗5次，再用蒸餾水清洗5次。

4.一種如權利要求1所述的直接檢測IL-6抗原的電化學免疫傳感器在檢測IL-6抗原中的應用。

5.如權利要求4所述的直接檢測IL-6抗原的電化學免疫傳感器在檢測IL-6抗原中的應用，其特征在于所述的應用包括以下步驟：1)將電化學免疫傳感器置于IL-6抗原溶液中，37℃下浸泡0.5～2h，反應結束后，取出傳感器用質量濃度0.01～0.05％的Tween-20水溶液和pH7.0～7.3的PBS緩沖液交替清洗，獲得結合抗原的電化學傳感器；2)以步驟1)獲得的結合抗原的電化學傳感器作為工作電極，以鉑絲為對電極，以Ag/AgCl電極作參比電極，在鐵氰化鉀和氯化鉀混合溶液的電解液中，采用電化學方法檢測電極表面上的電子傳遞電阻。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述IL-6抗原溶液為1×10^-17～1×10^-13g/ml的IL-6抗原的PBS緩沖溶液，所述PBS緩沖溶液pH值為7.0～7.3。

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述鐵氰化鉀和氯化鉀混合溶液為鐵氰化鉀、氯化鉀和水的混合溶液，所述混合溶液中鐵氰化鉀終濃度為5mM，氯化鉀終濃度為0.1mM。

8.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述電化學方法檢測為：在頻率為100mHz～10kHz，電壓為0.17V的條件下測試電極表面上的電子傳遞電阻。