[發明專利]一種高酶活、耐熱醛縮酶基因、酶、載體、工程菌及應用有效
| 申請號： | 201210064027.8 | 申請日： | 2012-03-12 |
| 公開（公告）號： | CN102559722B | 公開（公告）日： | 2017-05-17 |
| 發明（設計）人： | 謝恬;王秋巖;杜鵬飛 | 申請（專利權）人： | 杭州師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/60 | 分類號： | C12N15/60;C12N9/88;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司11257 | 代理人： | 王德楨 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高酶活 耐熱 醛縮酶 基因 載體 工程 應用 | ||
1.一種來源于Pyrococcus kodakaraensis的醛縮酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一種含有權利要求1所述醛縮酶基因的重組載體，其特征在于，所述重組載體是通過將SEQ ID NO:1所示的Pyrococcus kodakaraensis的DERA克隆至中間載體pET303/CT中制備而成。
3.一種用權利要求2所述重組載體轉化得到的重組基因工程菌E.Coil BL21/pET303CT/DERA，其特征在于，所述重組基因工程菌E.Coil BL21/pET303CT/DERA是通過將所述重組載體轉化E.Coil BL21中制備而成。
4.如權利要求1所述的醛縮酶基因在制備重組醛縮酶中的應用。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述的應用為：將SEQ ID NO:1所示的Pyrococcus kodakaraensis的DERA克隆至中間載體pET303/CT中，構建得到含有所述醛縮酶基因的重組載體；將所述重組載體轉化至大腸桿菌E.Coil BL21中，獲得的重組基因工程菌E.Coil BL21/pET303CT/DERA；將重組基因工程菌E.Coil BL21/pET303CT/DERA在含100mL100μg/mL氨芐青霉素的LB液體培養基中搖床過夜培養，將10ml過夜培養后的菌液倒入1L100μg/mL氨芐青霉素的LB液體培養基培養，直到菌液OD600達到0.6～0.8時加入IPTG終濃度為0.5mM，28℃誘導16h后，離心收集菌體，菌體用25ml磷酸緩沖液pH7.4使其重懸浮，超聲破碎細胞；離心取上清，含DERA的上清用0.22μm醋酸纖維素濾膜過濾后鎳柱親和層析進行純化獲得DERA純酶。
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