[發明專利]一種可同時抑制T、B淋巴細胞功能的免疫融合蛋白、其制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201210057651.5
• 申請日: 2012-03-06
• 公開（公告）號: CN102585016A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 胡品良;楊思儀;陳宏;高曉雨;耿達天;萬露;王星恒;王星源
• 申請（專利權）人: 江蘇健德生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K38/16;A61K47/48;A61P37/06
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

本發明涉及一種可同時抑制T、B淋巴細胞功能的免疫融合蛋白、其制備方法及其應用，屬于生物工程技術領域。

背景技術

自身免疫性疾病(autoimmunity?diseases)是機體免疫系統對自身成分發生免疫應答的疾病狀態，往往是由于T淋巴細胞和B淋巴細胞免疫功能亢進而導致的一類疾病。自身免疫性疾病在人群中的發病率約為3％～5％。自身免疫疾病種類很多，包括類風濕關節炎(RA)、銀屑病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、硬皮病、I型糖尿病(Type?I?diabetes)等一類疾病。

T淋巴細胞和B淋巴細胞是人體免疫系統的兩種最為重要的功能細胞，在機體免疫應答和免疫反應中扮演重要角色。T淋巴細胞介導細胞免疫，B淋巴細胞介導體液免疫，二者既相互區別又相互聯系。T細胞激活時需要其細胞膜上的抗原識別受體(TCR)識別抗原提呈細胞(APC)表面的主要組織相容性復合體(MHC)溝槽中特異抗原肽，構成T淋巴細胞免疫活化的第一信號。T淋巴細胞和抗原提呈細胞(APC)表面眾多的協同刺激分子(costimulatory?molecules)和相應受體(costimulatory?molecules?receptor，CMR)構成活化的第二刺激信號，例如CD4與MHC?II類分子配對；CD8與MHC?I類分子配對；CD28與B7(CD80)配對；LFA2(CD2)與LFA3(CD58)配對；LFA1與ICAM1配對等均可作為第二信號，其中以CD28與B7(CD80)相互作用在T淋巴細胞活化時最為重要。同樣地，B淋巴細胞對胸腺依賴抗原(TDAg)的刺激反應中需要與T淋巴細胞相互作用，B淋巴細胞才能活化。首先B淋巴細胞通過胞膜上的抗原識別受體(BCR)與抗原結合，抗原內化后，經胞內溶酶體等加工處理成順序決定簇抗原，順序決定簇抗原與MHC?II類分子結合表達于細胞膜表面，B淋巴細胞作為抗原提呈細胞(APC)將抗原遞呈給輔助性T淋巴(T?h)細胞，Th細胞活化并表達膜分子和分泌多種淋巴因子(IL-2，IL-4，IL-6等)，在這些分子作用下B淋巴細胞表達高親和力的BCR和豐富的MHCII類分子。在B淋巴細胞活化中CD40分子與CD40L的結合，B淋巴細胞活化因子(BlyS)分別與其三種受體即B細胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B細胞活化因子受體(BAFF-R)的結合，為B細胞活化的第二刺激信號。

綜上所述，T淋巴細胞和B淋巴細胞活化中共刺激信號(第二刺激信號)扮演著重要的角色，沒有共刺激信號T淋巴細胞和B淋巴細胞將不能活化。鑒于自身免疫性疾病往往是由于T淋巴細胞和B淋巴細胞過度活化，功能亢進而導致的一類疾病。所以，阻斷T淋巴細胞和B淋巴細胞活化共刺激信號可以降低免疫反應，達到治療自身免疫性疾病的目的，是目前治療自身免疫性疾病的措施之一。下表是全球已上市和在研臨床III期以上阻斷共刺激信號抗體類藥物的品種列表。

表1上市和在研臨床III期以上阻斷共刺激信號抗體類藥物的品種列表

表中alefacept、abatacept、belatacept和atacicept的結構均為受體-Fc融合蛋白。該類結構已經被證實是除了抗體藥物以外，能清除體內多余配體分子的一種有效手段。目前上市的有etanercept(1998)、alefacept(2003)、abatacept(2006)、rilonacept(2008)和belatacept(2011)均為此結構，其中不乏“重磅炸彈”級藥物，etanercept在2009年和2010年全球銷售額達80億和84億美元。受體-Fc融合蛋白中受體結構域在融合蛋白中執行結合配體的功能，而Fc部分(包括輕鏈恒定區)具有多種作用：易檢測，可使用通用的抗人二抗進ELISA檢測；易純化，通過與protein?A的結合而使用親和層析方便地純化；增加半衰期，IgG重鏈恒定區約有氨基酸殘基330個，輕鏈恒定區約有氨基酸殘基110個，組合成4肽鏈后分子量超過100kDa，大大延長藥物在體內的半衰期；可提供額外的生物學效應如補體激活、ADCC效應等免疫調節活性。此外，與抗體藥物相比受體-Fc融合蛋白不必進行繁瑣的抗體篩選和人源化過程，具有親和力高、免疫源性低等優點。