[發明專利]Bt殺蟲蛋白Cry1Ac-a的表達體系

有效

• 申請號: 201210057572.4
• 申請日: 2012-03-07
• 公開（公告）號: CN102586286A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 宋志平;覃曉萍;肖滿秋;馮延葉;楊忠
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/32
• 分類號: C12N15/32;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/325;C12R1/19
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.人工合成的Bt殺蟲蛋白的基因，其特征在于是對Cry1Ac編碼框和編碼序列進行改造和優化而獲得，即對Cry1Ac蛋白編碼框優化后再進行大腸桿菌密碼子偏好優化，并在5’端和3’端分別引入與表達載體一致的NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位點，氨基酸序列末端加入終止密碼子TAA而獲得；其氨基酸序列為SEQ.ID.?No.1?所示，記為Cry1Ac-a?；編碼表達的殺蟲蛋白氨基酸序列為SEQ.ID.?No.2所示。

2.一種如根據權利要求1所述的人工合成的Bt殺蟲蛋白的基因的表達載體，其特征在于，是將化學合成的基因Cry1Ac-a?的DNA片段通過NdeⅠ和EcoRⅠ雙酶切后連接到同樣酶切pET43.1a載體上而獲得,記為pET43.1a-Bt。

3.一種重組Cry1Ac-a殺蟲蛋白，其特征在于由下述步驟獲得：利用權利要求2所述的表達載體轉入表達宿主BL21菌株中，得到表達菌，記為BL21(pET43.1a-Bt)，發酵該表達菌，加入IPTG誘導高效表達，即獲得有活性的重組Cry1Ac-a殺蟲蛋白。