[發(fā)明專利]一種針對FLG基因RNA干擾的重組慢病毒載體及其制備無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210055624.4 | 申請日： | 2012-03-06 |
| 公開（公告）號： | CN102604994A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 黨寧寧;逄曙光;馬曉麗;邊紅;初晶學 | 申請（專利權）人： | 黨寧寧 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 馮鐵惠 |
| 地址： | 250013 山東省濟南*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 針對 flg 基因 rna 干擾 重組 病毒 載體 及其 制備 | ||
1.一種針對FLG基因RNA干擾的重組慢病毒載體，是自身失活的第三代慢病毒載體，其特征在于，其特征在于，所述的載體含PGLV/H1/GFP-Sh?FLG重組載體，所述的PGLV/H1/GFP-Sh?FLG重組載體是在PGLV/H1/GFP載體的多克隆位點中連接了雙鏈DNA片段；所述的雙鏈DNA片段的序列為以下序列中的一種：
(1)FLG-homo-274：
FLG-homo-274-S：
5’-GATCCGTTGGCTCAAGCATATTATTTCAAGAGAATAATATGCTTGAGCCAACTTTTTTG-3’
FLG-homo-274-AS：
5’-AATTCAAAAAAGTTGGCTCAAGCATATTATTCTCTTGAAATAATATGCTTGAGCCAACG-3’
(2)FLG-homo-769：
FLG-homo-769-S：
5’-GATCCGCACCACTGATAGTCTATTATTTCAAGAGAATAATAGACTATCAGTGGTGCTTTTTTG-3’
FLG-homo-769-AS：
5’-AATTCAAAAAAGCACCACTGATAGTCTATTATTCTCTTGAAATAATAGACTATCAGTGGTGCG-3’
(3)FLG-homo-1627：
FLG-homo-1627-S：
5’-GATCCGCCACGAGCAATCGGTAAATTTCAAGAGAATTTACCGATTGCTCGTGGCTTTTTTG-3’
FLG-homo-1627-AS：
5’-AATTCAAAAAAGCCACGAGCAATCGGTAAATTCTCTTGAAATTTACCGATTGCTCGTGGCG-3’
2.權利要求1所述的針對FLG基因RNA干擾的重組慢病毒載體的制備方法，其特征在于，根據(jù)FLG?mRNA序列，設計合成了雙鏈DNA片段，所述的雙鏈DNA片段為以下序列中的一種：
(1)FLG-homo-274：
FLG-homo-274-S：
5’-GATCCGTTGGCTCAAGCATATTATTTCAAGAGAATAATATGCTTGAGCCAACTTTTTTG-3’
FLG-homo-274-AS：
5’-AATTCAAAAAAGTTGGCTCAAGCATATTATTCTCTTGAAATAATATGCTTGAGCCAACG-3’
(2)FLG-homo-769：
FLG-homo-769-S：
5’-GATCCGCACCACTGATAGTCTATTATTTCAAGAGAATAATAGACTATCAGTGGTGCTTTTTTG-3’
FLG-homo-769-AS：
5’-AATTCAAAAAAGCACCACTGATAGTCTATTATTCTCTTGAAATAATAGACTATCAGTGGTGCG-3’
(3)FLG-homo-1627：
FLG-homo-1627-S：
5’-GATCCGCCACGAGCAATCGGTAAATTTCAAGAGAATTTACCGATTGCTCGTGGCTTTTTTG-3’
FLG-homo-1627-AS：
5’-AATTCAAAAAAGCCACGAGCAATCGGTAAATTCTCTTGAAATTTACCGATTGCTCGTGGCG-3’
然后將所述的DNA片段連接到PGLV/H1/GFP載體的多克隆位點中構建成PGLV/H1/GFP-Sh?FLG重組載體；再將PGLV/H1/GFP-Sh?FLG重組載體、pHelper1.0、pHelper?2.0三種載體共轉染293T細胞培養(yǎng)，獲得所述的重組慢病毒載體。
3.根據(jù)權利要求2所述的針對FLG基因RNA干擾的重組慢病毒載體的制備方法，其特征在于，在所述的雙鏈DNA片段末端引入BamH?I和EcoR?I酶切位點。
4.根據(jù)權利要求2所述的針對FLG基因RNA干擾的重組慢病毒載體的制備方法，其特征在于，用BamHI和EcoRI酶將PGLV/H1/GFP載體酶切，回收大片段后將其與所述雙鏈DNA片段連接后轉化感受態(tài)菌，挑取重組陽性克隆。
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