[發明專利]肺腺癌易感基因無創檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210053613.2
• 申請日: 2012-03-01
• 公開（公告）號: CN102586444A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 潘加奎;姜麗
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測肺腺癌易感基因無創檢測試劑盒，其特征在于：檢測CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位點多態性，XRCC1基因上Arg399Gln位點多態性，MTHFR基因上C677T位點多態性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性的6個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物與DNA測序引物、Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、SAP酶、ExoI酶、BigDye?mix、EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的特異性引物對是指針對CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位點多態性，XRCC1基因上Arg399Gln位點多態性，MTHFR基因上C677T位點多態性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性的6個單核苷酸多態性位點，能特異性擴增出包含這6個SNPs位點的DNA片段的引物對。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的DNA測序引物是針對CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位點多態性，XRCC1基因上Arg399Gln位點多態性，MTHFR基因上C677T位點多態性，GSTM1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性的6個單核苷酸多態性位點而設計，能通過DNA測序技術特異性檢測出上述6個SNPs位點基因型的DNA測序引物。

4.根據權利要求1所示的試劑盒，其特征在于，所含的6對特異性引物序列如下：

(1)CYP1A1(Ile462Val)正向引物：5′CTTGCCTGTCCTCTATCCTTTG3′

???CYP1A1(Ile462Val)反向引物：5′CAGGCTGAACCTTAGACCACA3′

(2)CYP1A1(MspI)正向引物：5′GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3′

???CYP1A1(MspI)反向引物：5′AGGTTCTTGAAAGCAGGGACT3′

(3)XRCC1(Arg399Gln)正向引物：5′TGACCTTGCGGGACCTTAG3′

???XRCC1(Arg399Gln)反向引物：5′CCAAGACCCTTTCACTCCTATC3′

(4)MTHFR(C677T)正向引物：5′AGGGAGGCTTCAACTACGC3′

???MTHFR(C677T)反向引物：5′GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3′

(5)GSTM1(Null/Present)正向引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

???GSTM1(Null/Present)反向引物：5′GTTGGGCTCAAATATACGGTGG3′

(6)GSTT1(Null/Present)正向引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

???GSTT1(Null/Present)反向引物：5′TCACCGGATCATGGCCAGCA3′

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所含的6條DNA測序引物序列如下：

(1)CYP1A1(Ile462Val)測序引物：5′CTTGCCTGTCCTCTATCCTTTG3′

(2)CYP1A1(MspI)測序引物：5′GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3′

(3)XRCC1(Arg399Gln)測序引物：5′TGACCTTGCGGGACCTTAG3′

(4)MTHFR(C677T)測序引物：5′AGGGAGGCTTCAACTACGC3′

(5)GSTM1(Null/Present)測序引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

(6)GSTT1(Null/Present)測序引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括：

(1)PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液2.5ul，25mM?dNTP混合液0.2ul，5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul，20uM特異性引物對，每條引物各0.25ul，ddH₂O?19.175ul。

(2)PCR產物純化體系：1U/ul?SAP酶0.75ul，10U/ul?ExoI酶0.375ul，ddH₂O?3.875ul。

(3)測序反應體系：25％BigDye?mix1ul，3.2uM?DNA測序引物1ul，125mMEDTA溶液1ul，100％乙醇溶液15ul，70％乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O2ul。

本試劑盒供一人份檢測應用，試劑盒的保存溫度為-20℃。