[發明專利]一種檢測水產品中4-己基間苯二酚殘留量的試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201210046637.5
• 申請日: 2012-02-28
• 公開（公告）號: CN102539610A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 林海丹;席靜;鄒志飛;謝守新;邵琳智;陳毓芳;林峰
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/12
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 曹愛紅

技術領域

本發明涉及化學物質的理化分析領域，具體涉及一種檢測水產品中4-己基間苯二酚殘留量的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

4-己基間苯二酚(4-Hexylresorcinol，4-HR)，別名2，4-二羥基己基苯、己雷鎖辛、4-HR，CAS號位133-77-6，4-己基間苯二酚藥物結構式如下所示：

4-己基間苯二酚為白色或黃白色針狀結晶，有弱臭，強澀味；遇光、空氣變淡棕或粉紅色，微溶于水、乙醇、甲醇、甘油、醚、氯仿、苯和植物油中。4-己基間苯二酚是一種能抑制褐變的新型抗氧護色劑。用于保持蝦、蟹等甲殼水產品在貯存過程中色澤良好不變黑(蝦類黑變主要是機體存在的多酚氧化酶催化反應所致)。實驗表明4-己基間苯二酚可通過抑制多分氧化酶活性控制褐變延長貯存期。

我國GB?2760-2007《食品添加劑使用衛生標準》規定，4-己基間苯二酚的使用限量，可按生產需要適量用于防止蝦類褐變，但其最大殘留限量MRL(maximum?required?limits)值應小于1mg/kg。歐盟95/2/EC指令中規定在甲殼類中作為抗氧化劑使用，其MRL為2mg/kg。聯合國FAO/WHO所屬JECFA于1995年第44次會議上，4-己基間苯二酚被批準使用，其規定對甲殼類處理濃度可達50mg/L，食用部分的MRL為1mg/kg。

目前4-己基間苯二酚殘留的檢測方法主要有液相色譜法。但存在很多不足之處：比如：4-己基間苯二酚易溶于乙醇、甲醇、甘油、醚、氯仿、苯和植物油中，采用甲醇、乙醇提取的雜質太多，特別是極性強的雜質；選用甲醇作為提取溶劑后需經C₁₈柱凈化；因此，為得到較好的回收率，需要選擇合適的提取溶劑。同時也需要選擇合適的凈化溶劑以達到理想的凈化效果。

為滿足國內外對水產品中4-己基間苯二酚殘留量測定的需求，需要對上述樣品前處理條件和色譜分析條件進行優化，建立一種高選擇性、高靈敏度測定水產品中4-己基間苯二酚殘留量的液相色譜-熒光方法。

發明內容

本發明的目的是針對上述現有技術的缺陷，提供一種檢測水產品中4-己基間苯二酚殘留量的試劑盒，可達到高選擇性、高靈敏度的效果，廣泛應用于蝦、魚和蟹等進出口水產品中4-己基間苯二酚殘留量的測定。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

本發明的一種檢測水產品中4-己基間苯二酚殘留量的試劑盒，包括樣品提取溶劑和凈化溶劑，所述提取溶劑為乙酸乙酯，所述凈化溶劑為甲醇-乙腈-水溶液和乙腈飽和正己烷溶液。

優選的，所述甲醇-乙腈-水溶液中的甲醇、乙腈、水的體積比為1∶2∶1。

所述甲醇-乙腈-水溶液與所述乙腈飽和正己烷溶液的使用體積比為1∶1。

本發明還提供了一種利用本發明的試劑盒對水產品中4-己基間苯二酚殘留量進行檢測的方法，具體步驟按如下進行：

(1)樣品提?。悍Q取樣品于離心管中，加入提取溶劑乙酸乙酯和無水硫酸鈉，勻質，離心，上清液過無水硫酸鈉轉移到濃縮瓶中，另取一支離心管，加入提取溶劑乙酸乙酯15mL洗滌勻質器刀頭，洗滌液移入第一支離心管中，于渦旋振蕩器振蕩提取，離心，合并洗滌液于100mL濃縮瓶中，38℃旋轉蒸發濃縮至干，所述樣品：提取溶劑：無水硫酸鈉的質量體積質量比為1∶10∶1.5；

(2)凈化：步驟(1)中的殘渣加入凈化溶劑甲醇-乙腈-水溶液溶解，所述甲醇-乙腈-水溶液中各組分體積比為1∶2∶1，超聲波水浴，渦旋振蕩，加入凈化溶劑乙腈飽和正己烷脫脂，渦旋，轉移入離心管中，離心，棄正己烷層，重復操作一次，下層過濾膜，供高效液相色譜測定，所述凈化溶劑中甲醇-乙腈-水溶液、乙腈飽和正己烷的質量體積比為1∶1；

(3)液相色譜測定：色譜條件如下：

a)色譜柱：Agilent?TC?C₁₈?250mm×4.6mm(i.d.)，5μm，或相當者；

b)流動相：乙腈-水溶液(75+25，V/V)；

c)流速：1.0mL/min；

d)檢測波長：激發波長276nm；發射波長307nm；

e)柱溫：30℃；

f)進樣量：10μL；

(4)結果計算。

優選的，所述步驟(1)中的勻質時間為30s，離心條件為4000r/min，離心3min。

優選的，所述步驟(2)中的水浴時間為10s，渦旋30s，濾膜為0.20μm的濾膜。