[發明專利]一種測定水中葉綠素a的方法

無效

• 申請號: 201210046341.3
• 申請日: 2012-02-27
• 公開（公告）號: CN102590118A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張素春;舒坦;杜茂安;安眾一;楊雪
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/42
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 韓末洙

技術領域

本發明涉及一種測定水中葉綠素a的方法。

背景技術

目前水體中葉綠素的測定方法主要有國家環境保護局公布的《水和廢水監測分析方法》(第四版)中推薦的丙酮研磨法測定葉綠素a，該方法是用醋酸纖維濾膜過濾水樣，截留藻類的濾膜低溫干燥6～8h后，加90％丙酮反復研磨提取，離心，用分光光計測定并計算chla含量。該方法缺點是①反復研磨提取中，葉綠素暴露在環境中，易發生光解；②丙酮易溶解乙酸顯微濾膜，使濾膜上的葉綠素a粘滯于研磨器具；③丙酮對人體有毒，且揮發性強，對工作人員身體健康不利；④在反復添加溶劑和反復轉移中，溶劑易粘與研磨器壁上，造成葉綠素的流失。

中國專利文獻CN1631117公開了一種葉綠素a的測定方法，即乙醇研磨法。該方法是用0.8um的醋酸纖維濾膜過濾水樣，用90％乙醇浸泡研磨，離心萃取，用分光光度法測定chla，該方法使用90％乙醇代替丙酮，增加了方法的安全性，但也有不足之處：①仍然需要研磨，過程繁瑣，葉綠素易流失；②使用0.8um的濾膜，孔徑過大，會使部分藻類無所截留而流失。

文獻《乙醇法測定浮游植物葉綠素a含量的討論》中使用了乙醇冷凍法，該方法是用0.45μm醋酸纖維濾膜過濾水樣，用90％乙醇冷凍浸泡截留有藻細胞的濾膜12h，之后離心萃取，用分光光度法分酸化前和酸化后兩步測定水樣在665nm和750nm處得吸光度值，根據公式計算。該方法優點是使用乙醇做萃取劑安全性高，并且不需要研磨；缺點是需要鹽酸酸化，鹽酸使用量不好控制，重現性差。

發明內容

本發明是要解決現有的乙醇冷凍法測定葉綠素a的方法需要鹽酸酸化，鹽酸使用量不好控制，導致測定穩定性差、重現性差的問題，提供一種測定水中葉綠素a的方法。

本發明測定水中葉綠素a的方法，按以下步驟進行：

一、取50～200ml水樣，采用0.45μm醋酸纖維濾膜進行過濾，真空泵壓力控制在0.05MPa，獲得截留有藻細胞的濾膜；二、將截留有藻細胞的濾膜剪碎放入裝有6ml體積濃度為90％的乙醇溶液的離心管中，置于4℃冷藏12～24h；三、然后將離心管于8000r/min離心15min，收集上清液，再向離心管中補加4ml體積濃度為90％的乙醇溶液，再于8000r/min離心5min，收集上清液，合并兩次離心獲得的上清液，并加入質量濃度為90％的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；四、將萃取液于8000r/min離心5min，得萃取液上清液，以質量濃度為90％的乙醇溶液做參比，用分光光度計測定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波長下的吸光度值，按以下公式計算水體中葉綠素a的含量：Chla＝[12.12(D664-D750)-1.58(D647-D750)-0.08(D630-D750)]Ve/V；其中Chla為水樣中葉綠素a的含量，μg/L；D630、D647、D664和D750分別為萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波長下的吸光度值；Ve為萃取液的總體積，ml；V為抽濾的水樣體積，L。

本發明無需研磨，可大大節省人力，并避免因轉移萃取液而造成的葉綠素損失；本發明使用乙醇作為萃取液，對人體安全無毒害；測定步驟不需要鹽酸酸化，因此不受鹽酸酸化程度的影響；提取更完全，結果重現性好。

具體實施方式

本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。

具體實施方式一：本實施方式測定水中葉綠素a的方法，按以下步驟進行：