[發明專利]利用酪丁酸梭菌發酵甘蔗渣水解液生產丁酸的工藝

無效

• 申請號: 201210042829.9
• 申請日: 2012-02-24
• 公開（公告）號: CN102559782A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 蔡謹;徐志南;黃磊;王金;施周銘
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12P7/52
• 分類號: C12P7/52;C12R1/145
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 韓介梅

1.利用酪丁酸梭菌發酵甘蔗渣水解液生產丁酸的工藝，其特征是包括以下步驟：

1）用接種針蘸取酪丁酸梭菌菌液，在含有50?mg?/?mL丁酸鈉的強化培養基平板上劃線后，?置37?℃培養72?小時；

2）將步驟1）平板上的單菌落接種于含50?mL生長培養基的100?mL厭氧瓶中培養72?小時，得到一級種子；

3）取1.5?mL一級種子接種于含50?mL生長培養基的100?mL厭氧瓶中培養72?小時，得到二級種子，作為發酵母種；

4）取3?mL發酵母種接種于含100?mL生長培養基的500?mL厭氧瓶中培養48?小時后，?接種于含2?L?生長培養基的5?L預發酵罐中進行24?小時的擴大培養，使菌體濃度達到6.0-10.0?g/L，利用蠕動泵以60-100?mL/min的速度將經擴大培養的培養液泵入纖維床生物反應器內，維持循環，當游離的菌體濃度降為1.0-3.0?g/L，將上述的培養液更換為甘蔗渣水解液發酵培養基進行批次發酵、補料發酵或反復批次發酵，得到丁酸；發酵過程中，攪拌轉速控制在150?rpm，溫度設定為37°С，用6?mol/L的NaOH維持pH在6.0；

上述的甘蔗渣水解液發酵培養基成分包括：總糖70?g/L、酵母抽提物?5?g/L、蛋白胨?5?g/L、（NH₄）₂SO₄?3?g/L?、K₂HPO₄?1.5?g/L、MgSO₄·7H₂O?0.6?g/L、FeSO₄·7H₂O?0.03?g/L；所說的總糖為甘蔗渣水解液配制而成，其中甘蔗渣水解液制備方法如下：將烘干后的甘蔗渣與0.3mol/L硫酸以質量比1:10混合，于121℃水解30?min，過濾，離心取上清，將pH值調至6.0；

上述的生長培養基成分為：葡萄糖?30?g/L、酵母抽提物?5?g/L、蛋白胨?5?g/L、（NH₄）₂SO₄?3?g/L?、K₂HPO₄?1.5?g/L、MgSO₄·7H₂O?0.6?g/L、FeSO₄·7H₂O?0.03?g/L；

上述的強化培養基是在生長培養基的基礎上添加50?mg/mL丁酸鈉，培養條件：37°С、pH?6.0、厭氧環境。