[發明專利]一種納米熒光微球，其制備方法及其用作免疫層析方法的標記物的用途

無效

• 申請號: 201210039875.3
• 申請日: 2012-02-21
• 公開（公告）號: CN102604305A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 李超;張鵬;夏志道
• 申請（專利權）人: 蘇州納諾康生物技術有限公司
• 主分類號: C08L51/00
• 分類號: C08L51/00;C08K5/18;C09K11/06;C08F265/06;C08F2/22;B01J13/14;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;汪青

技術領域

本發明涉及一種適用作免疫層析的標記物的納米熒光微球及其制備方法和用途。

背景技術

在生物和醫學檢測中，經常用到免疫分析法，它包括放射免疫分析、酶聯免疫分析及免疫層析等方法。放射免疫分析和酶聯免疫分析法需要昂貴的設備、專業的操作人員和復雜的操作步驟，難以快速得到檢測結果。免疫層析法因具有操作簡單、快速及成本底等特點，而常用于快速定性或半定量檢測。

免疫層析技術是出現于80年代初期的一種獨特的免疫分析方式，它通常以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動，并同時使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物受體（如抗體或抗原）發生高特異、高親和性的免疫反應。免疫層析技術常見的示蹤粒子有膠體金、乳膠、膠體硒、明膠等，其中運用最成功的標記物為膠體金，例如已出現檢測鹽酸克倫特羅、乙肝表面抗原、黃曲霉毒素和促黃體激素等的膠體金試紙條。

然而膠體金免疫層析技術檢測靈敏度較低，在實際檢測中只能對檢測物進行定性或半定量，無法準確定量。目前，已有相關專利報道了以熒光納米微粒為標記物進行免疫層析檢測，如公開號為CN1645146A的專利公開了一種用熒光稀土納米顆粒作為標記物的免疫層析方法及其檢測試紙條的制備；公開號為CN1866012A的專利公開了一種定量、快速的免疫檢測方法及其專用裝置，該方法將熒光物質螯合物Eu³⁺、SrTi³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺與有機高分子納米微粒結合，制備成熒光微粒，通過熒光檢測來進行定量，但是這些納米熒光微球都是在紫外光源下激發，紫外光源的設置增加了檢測儀器的成本。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種粒徑穩定、光譜適用于可見發射光的納米熒光微球，采用該納米熒光微球作為標記物的免疫層析方法，簡便快速、靈敏度高且可進行定量檢測。

本發明同時還要提供一種納米熒光微球的制備方法，該方法可獲得粒徑穩定、光譜適用于可見發射光的納米熒光微球，并且該方法簡單。

為解決上述技術問題，本發明采用的一種技術方案是：

一種納米熒光微球，具有核殼結構，該納米熒光微球的粒徑為200~500nm，其內核為包含有熒光分子的聚合物微球，外殼具有修飾在所述聚合物微球外表面上的一種或多種官能團，該所述官能團能夠直接與配體或生物大分子反應形成微球表面的共價鍵連接，或在激活后與配體或者生物大分子進行共價標記；所述的聚合物微球為聚甲基丙烯酸甲酯的微球或甲基丙烯酸甲酯與其它單體共聚形成的共聚物的微球或者它們的混合物，其中甲基丙烯酸甲酯單元的重量至少占所述納米熒光微球總重量的50%，所述的熒光分子的重量占所占納米熒光微球總重量的0.05%~5%。

根據本發明，所述甲基丙烯酸甲酯與其它單體共聚形成的共聚物中，甲基丙烯酸甲酯與所述其它單體的結構單元數均大于等于50。所述的其它單體為包括但不限于氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸等。

根據本發明，所述的官能團可以為選自羧基，乙醇胺基，羥基，胺基，氨基，亞胺基，環氧基，異氰酸酯基，金屬醇鹽，及聚乙二醇基中的一種，其中優選為羧基。

根據本發明，所述熒光分子指在適當的激發波長下可發射熒光的物質。本發明中，熒光分子優選為熒光素及其衍生物、羅丹明、腎上腺素染料、氟硼瑩等。其中，更優選采用羅丹明例如羅丹明?Red-X和羅丹明?6G等作為熒光分子。熒光分子的重量優選為所述納米熒光微球總重量的0.2%~5%。

優選地，本發明的納米熒光微球的粒徑為350~400nm，更優選為370~390nm。