[發明專利]一種調控HLA-G表達的miRNA及其應用

無效

• 申請號: 201210036802.9
• 申請日: 2012-02-17
• 公開（公告）號: CN102618542A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 王曉紅;李博;王珺;雷潔;劉闖;馬媛;趙宏喜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K45/00;A61P15/06
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于人類白細胞相關抗原G(HLA-G)技術領域，涉及一種調控HLA-G表達的miRNA及其應用。

背景技術

人類白細胞抗原G是人類主要組織相容性復合物(MHC)，屬非經典HLA-I類抗原，共有7種異構體，以膜結合型(HLA-G1、G2、G3、G4)和可溶型(HLA-G5、G6、G7)兩種形式存在，主要在人的母胎界面絨毛膜外滋養細胞上表達。HLA-G蛋白的這種獨特分布及在母胎免疫中的重要作用逐漸引起了人們的高度重視。關于HLA-G蛋白的研究已成為生殖免疫領域的一個研究熱點。

(1)HLA-G在妊娠早期的生物學功能

在妊娠過程中，從胚胎著床開始，胚胎與母體開始了真正意義上的“親密接觸”，進而啟動粘附、遷移、基質降解、侵襲母體血管及新生血管生成等信號級聯反應，生理性侵襲子宮內膜并增殖分化形成胎兒及其附屬物。HLA-G特異性表達于母胎界面，在母體與胎兒的“對話”過程中發揮著重要的免疫和非免疫學功能。

HLA-G在妊娠早期的免疫學功能：母體對屬于同種半異體抗原的早期胚胎的免疫耐受是妊娠成功的關鍵因素。近年來的研究發現，HLA-G在胚胎植入時的生殖免疫學功能主要表現在以下幾個方面：a.抑制NK(natural?kill，NK)細胞的殺傷活性。在胚胎著床期間，子宮蛻膜有大量浸潤的免疫活性細胞，其中80％是NK細胞，HLA-G能抑制NK細胞的殺傷活性，從而在母胎免疫耐受上起重要作用；b.通過調節細胞因子的釋放來抑制NK細胞的非特異性免疫反應，進一步抑制NK細胞的殺傷作用；c.抑制T細胞殺傷功能。T細胞占妊娠早期子宮蛻膜淋巴細胞的20％。HLA-G可抑制蛻膜和外周血細胞毒性T細胞(cytotoxic?T?lymphocyte，CTL)的細胞殺傷作用，保護胚胎和胎兒免受母體CTL細胞的殺傷；d.誘導T細胞的凋亡。

HLA-G在妊娠早期的非免疫學功能：在妊娠早期胚胎植入后，胚胎的滋養層細胞與內膜接觸并迅速增殖分化形成具有侵襲性的滋養細胞，現已證實HLA-G主要表達于母胎界面具有侵襲性的絨毛外滋養層細胞，高表達于早孕至妊娠4～5個月時的胎盤絨毛。在對葡萄胎的研究中還揭示了，HLA-G在葡萄胎的表達高于早孕絨毛，在侵蝕性葡萄胎，滋養細胞具有更強的侵襲力，HLA-G蛋白的表達亦最強，這提示HLA-G的作用并不僅局限于免疫保護，還可能與滋養細胞的侵襲、轉移性相關。

(2)HLA-G蛋白特異性表達于母胎界面絨毛膜外滋養層細胞，與反復自然流產的發生密切相關

妊娠是一種特殊而且復雜的生理過程，胎兒對于母體來說是一種半同種異形體，所以母體必須對胚胎產生免疫耐受才能維持妊娠的正常進行，因此，母胎界面NK細胞和T細胞活性的抑制被視為每次成功妊娠的保障。在妊娠早期母胎界面，子宮NK細胞形成了最重要的免疫分子，而且攜帶著HLA抗原的抑制性受體。HLA-G特異性的分布于母胎界面，在此可以檢測到HLA-G蛋白水平的高表達，盡管HLA-C也檢測到了高表達，但只是瞬時表達增高。據報道，HLA-G的異常表達與反復自然流產的發生具有密切的聯系。體外實驗證明，不同來源的高表達HLA-G的細胞，其子宮和外周血中NK細胞毒活性都得到了抑制，這提示我們：母胎界面HLA-G與NK細胞的相互聯系，對妊娠結局至關重要。

HLA-G作為細胞表面類型I?MHC分子，扮演著抵御母體NK細胞攻擊的角色。有研究表明，在HLA缺失的細胞中高表達HLA-G，則會降低對NK細胞介導的細胞降解的敏感性。近期研究(2010年)證實，HLA-G可以直接抑制NK細胞毒活性，而不需要HLA-E分子的間接作用。進一步研究證實，HLA-G通過與NK細胞表面抑制性受體ILT-2、ILT-4的特異性結合，從而抑制NK細胞的細胞降解功能，除此之外，NK細胞受體KID2DL4也被認為與HLA-G特異性結合抑制NK細胞活性。我們知道，ILT-2、ILT-4還可以與其他的HLA-I分子結合，但研究表明，ILT-2、ILT-4與HLA-G的親和性遠遠高于其他的HLA-I分子。而且，在HLA-G高表達的細胞系中，特異性添加ILT-2受體的抗體共孵育，細胞降解功能得以恢復。由此可見：HLA-G分子極有可能通過與ILT-2、ILT-4以及KID2DL4受體的特異性結合抑制NK細胞活性，從而影響妊娠結局。

(3)HLA-G特異性表達于母胎界面絨毛膜外滋養層細胞的分子調控機制研究