[發(fā)明專利]凝血酶原時(shí)間測(cè)定試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210032584.1
• 申請(qǐng)日: 2012-02-14
• 公開（公告）號(hào): CN102608337A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魯翌;田樹偉;劉介
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢塞力斯生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/86
• 分類號(hào): G01N33/86
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 陳家安

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種臨床實(shí)驗(yàn)室用體外診斷試劑盒及其制備，它用于人血漿標(biāo)本凝血酶原時(shí)間的測(cè)定。更具體地說(shuō)它是一種采用兔腦組織因子和重組人組織因子聯(lián)合制備凝血酶原時(shí)間測(cè)定試劑盒及其其制備方法。

背景技術(shù)

醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)凝血實(shí)驗(yàn)，即凝血常規(guī)四項(xiàng)包括凝血酶原時(shí)間測(cè)定(PT)、部分活化凝血活酶時(shí)間測(cè)定(APTT)、凝血酶時(shí)間測(cè)定(TT)、纖維蛋白原濃度測(cè)定(FIB)，主要用于出血性疾病的篩查與診斷、血栓性疾病與血栓前狀態(tài)檢查、各種抗凝治療監(jiān)測(cè)以及手術(shù)前檢查。其中，PT為反應(yīng)機(jī)體外源性凝血途徑的主要檢測(cè)指標(biāo)，常用于：1血液凝固異常可疑包括凝血酶原復(fù)合物多個(gè)因子(II、VII、X)，因子V，纖維蛋白原及去纖維蛋白原血癥的篩選實(shí)驗(yàn)；2監(jiān)測(cè)及調(diào)整維生素K拮抗劑，香豆素誘導(dǎo)劑的治療；3監(jiān)測(cè)維生素K缺乏及肝臟疾病；4術(shù)前篩選可能的止血異常疾病。目前PT的臨床檢測(cè)多采用Quick法，其原理為在缺乏血小板的血漿內(nèi)加入組織促凝血酶原激酶(組織因子)和Ca²⁺后凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟福ㄟ^(guò)產(chǎn)生的凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。PT測(cè)定結(jié)果報(bào)告方式有三種：秒值、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的百分活度，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率(international?normalized?ratio?INR)。PT測(cè)定結(jié)果受眾多因素的影響，其中凝血酶原試劑為最重要的影響因素。商品化的組織因子在敏感性上與WHO推薦的有所不同，因此生產(chǎn)商需要對(duì)每批試劑確定一個(gè)敏感因子，此即國(guó)際敏感指數(shù)ISI(international?sensitivity?index)，它用來(lái)表示試劑中組織凝血活酶相對(duì)活性的指數(shù)。不同來(lái)源的組織凝血活酶對(duì)凝血因子的敏感性不同，為了使不同敏感性的組織凝血活酶在PT檢測(cè)中得到同樣的結(jié)果，必須要制定一個(gè)共同遵循的敏感指標(biāo)。WHO先后制備或發(fā)出了凝血活酶的多種國(guó)際參考品(IRP)，用已知ISI值的國(guó)際參考試劑與待測(cè)組織活酶試劑檢測(cè)同一標(biāo)本，對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析，就可得出試劑的ISI數(shù)值。目前用于生產(chǎn)和出售的組織凝血活酶試劑必須標(biāo)有ISI數(shù)值[1]。PT測(cè)定影響因素很多，其中最關(guān)鍵的是凝血酶原試劑，由于所用凝血酶原試劑的敏感度不同，即使在相同條件下對(duì)同一標(biāo)本測(cè)得的結(jié)果也不同，而我國(guó)醫(yī)生常用的凝血酶原百分活動(dòng)度則因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)血漿不統(tǒng)一而相差更大，甚至達(dá)到難以比較的程度。因此WHO于1981年提出PT標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告方式為INR，INR＝(PTR)ISI，其中ISI為國(guó)際敏感度指數(shù)，PTR為PT測(cè)定秒值(s)與PT標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照秒值(s)的比值。經(jīng)上述公式換算成INR值后，能克服試劑之間敏感度差異的影響，使INR值報(bào)告方式具有可比性和可信度[2]。國(guó)內(nèi)多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)告人工心臟瓣膜置換術(shù)后采用國(guó)際正常標(biāo)準(zhǔn)化比值對(duì)口服抗凝藥物治療的監(jiān)測(cè)，結(jié)果穩(wěn)定、可靠，具有可比性[3～5]。在口服抗凝藥治療中，華法林類藥物是非常有效的抗凝藥物，它在不同病人體內(nèi)的新陳代謝率不同，因而它的劑量必須仔細(xì)監(jiān)測(cè)，否則就會(huì)因超劑量而造成出血或因?yàn)閯┝坎蛔銓?dǎo)致疾病復(fù)發(fā)，血栓形成。由此可見在凝血酶原時(shí)間的測(cè)定中，準(zhǔn)確的INR結(jié)果對(duì)臨床抗凝治療藥物的監(jiān)測(cè)非常重要。但是不同ISI值的PT試劑測(cè)得的INR結(jié)果差異非常顯著，而且當(dāng)標(biāo)本的INR值越高時(shí)，測(cè)定結(jié)果差異越顯著。理論上，ISI值越接近1.0，表明試劑越敏感[1]。根據(jù)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心凝血試驗(yàn)的室間質(zhì)控中INR的成績(jī)也可以看出ISI值越接近1.0的PT試劑，測(cè)得的結(jié)果越準(zhǔn)確。所以，在日常工作為了確保口服抗凝藥物治療有效性和安全性，為了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性很多實(shí)驗(yàn)室都建議使用接近ISI值1.0的凝血酶原試劑。

目前，醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)PT多用凝血分析儀進(jìn)行檢測(cè)。從方法學(xué)上講，凝血分析儀可分為三大類：光學(xué)法(代表廠家為Sysmex)、磁珠法(代表廠家為Stago)和光學(xué)磁珠法(代表廠家為Brink?Electronik)。有別于傳統(tǒng)的手工法，不同儀器的方法差異使各類儀器的敏感度指數(shù)不一樣，這為PT試劑的最終檢測(cè)靈敏度引入了新的影響因素。因此，為不同機(jī)型調(diào)配出ISI值趨近于1.0的試劑將有助于統(tǒng)一不同機(jī)型的檢測(cè)結(jié)果，有利于PT檢查項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)化。