[發(fā)明專利]篩查16SrXII組植原體的芯片及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210024966.X
• 申請日: 2012-02-06
• 公開（公告）號: CN102534022A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙文軍;張永江;朱水芳;牟海清
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C40B40/06
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物信息學(xué)及生物檢疫鑒定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及篩查16SrXII組植原體的芯片及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

16Sr?XII組植原體主要包括澳大利亞植原體候選種、Bois?Noir植原體、頑固植原體(stolbur)等多種植原體。葡萄金黃化病是歐洲最具經(jīng)濟(jì)影響的葡萄黃化病，在歐洲葡萄園導(dǎo)致巨大產(chǎn)量損失。由澳大利亞植原體候選種引起的葡萄黃化病(以下簡稱為AusGY)在澳大利亞新南威爾士和維多利亞溫暖地區(qū)的葡萄園中頻繁發(fā)生。此外，澳大利亞植原體候選種還可以引起多種經(jīng)濟(jì)作物的嚴(yán)重病害：侵染葡萄時(shí)，引起葡萄黃化病，其癥狀和危害與葡萄金黃化病相似；侵染草莓時(shí)，引起草莓致死性黃化病，可導(dǎo)致草莓苗死亡；侵染番木瓜時(shí)，引起番木瓜頂枯病，是毀滅性病害；侵染澳洲朱蕉時(shí)，引起澳洲朱蕉猝衰病；侵染新西蘭亞麻時(shí)，引起新西蘭亞麻黃葉病，是致死性病害。因此，經(jīng)濟(jì)影響十分重要。

有觀點(diǎn)認(rèn)為澳大利亞植原體候選種起源于新西蘭并隨后傳播到澳大利亞。盡管許多方面尚不清楚，但在其它植物上已經(jīng)掌握的證據(jù)表明，應(yīng)將其列為檢疫性病害。EPPO也已經(jīng)將此病列入警戒名單。澳大利亞植原體候選種專性寄生在寄主植物的韌皮部組織的篩管細(xì)胞中和介體昆蟲如Oliarus?atkinsoni?Myers體內(nèi)。迄今無法在活體外人工培養(yǎng)。用DAPI或Hoechst?33258熒光染色法可以在熒光顯微鏡下從韌皮部組織中觀察到植原體的特異熒光，只有在電子顯微鏡下才能看清其粒體形態(tài)。澳大利亞植原體候選種無細(xì)胞壁，形態(tài)多樣，大小一般在80～1000nm。目前對AusGY的研究尚不夠深入，對其發(fā)生規(guī)律和侵染循環(huán)尚不清楚。葡萄上的傳播介體昆蟲尚不明確。有研究報(bào)道說澳大利亞和新西蘭野生的一種臭草屬植物Coprosma?robusta可能是澳大利亞植原體候選種的庫源寄主。盡管在新西蘭亞麻上已經(jīng)明確葉蟬Oliarus?atkinsoni是葡萄金黃化植原體的傳播介體，但O.atkinsoni是單食性昆蟲，肯定不是其它植物上的傳播介體。由于澳大利亞植原體候選種的寄主范圍廣泛，因此，在不同植物上，其生活史會(huì)有所不同，侵染循環(huán)也復(fù)雜化。澳大利亞植原體候選種為種苗傳，而且寄主范圍廣，易通過多種植物繁殖材料的進(jìn)口貿(mào)易運(yùn)輸傳入。

在新西蘭很早就查明葉蟬Oliarus?atkinsoni在新西蘭亞麻上是該植原體的傳播介體，但在葡萄等其它植物上的傳播介體尚不清楚。不過有一點(diǎn)可以肯定：在不同的寄主上，澳大利亞植原體候選種存在不同的傳播介體。O.atkinsoni主要危害新西蘭亞麻，有可能隨引種的新西蘭亞麻傳入。

目前，針對16SrXII組植原體的檢測方法主要為①血清學(xué)檢測方法，靈敏度不高，易產(chǎn)生假陽性；②基于核酸的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，主要包括PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR等技術(shù)，靈敏度和特異性相對較高，但存在交叉污染，在通用性和標(biāo)準(zhǔn)化方面存在不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種篩查16SrXII組植原體的探針。

本發(fā)明提供的篩查16SrXII組植原體的探針，由3條探針組成，所述3條探針的核苷酸序列依次分別為序列表中的序列1-序列3。

上述探針中，所述16SrXII組植原體為澳大利亞植原體候選種。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種篩查16SrXII組植原體的基因芯片。

本發(fā)明提供的篩查16SrXII組植原體的基因芯片，為將上述的探針固定在片基表面得到的基因芯片。

在上述基因芯片中，所述片基為醛基化玻璃片基，在本發(fā)明的實(shí)施例中采用的是博奧生物有限公司晶微陣列基片，產(chǎn)品目錄號：420022。

在上述基因芯片中，所述16SrXII組植原體為澳大利亞植原體候選種。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種篩查16SrXII組植原體的試劑盒。

本發(fā)明提供的試劑盒，包括上述的基因芯片。

在上述試劑盒中，還包括如下引物組：

所述引物組由引物對A和引物對B組成；

所述引物對A由引物1和引物2組成；

所述引物對B由引物3和引物4組成；

所述引物1的核苷酸序列為序列表中的序列4；

所述引物2的核苷酸序列為序列表中的序列5；

所述引物3的核苷酸序列為序列表中的序列6；

所述引物4的核苷酸序列為序列表中的序列7；

上述試劑盒由上述的基因芯片和上述引物組組成。

上述試劑盒中，所述16SrXII組植原體為澳大利亞植原體候選種。