[發明專利]環氧二烯作為破骨細胞分化抑制劑的應用

有效

• 申請號: 201210020829.9
• 申請日: 2012-01-29
• 公開（公告）號: CN102552246A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 俞春東;朱敬偉;陳強;趙揚;莫萍麗;沈月毛
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: A61K31/366
• 分類號: A61K31/366;A61P19/10
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種環氧二烯化合物，尤其是涉及一種環氧二烯作為破骨細胞分化抑制劑的應用。

背景技術

骨質疏松癥是以低骨量和骨組織微結構退化為特征，使得骨脆性增加而易于發生骨折的一種全身性骨骼結構退化疾病，包括原發性和繼發性骨質疏松癥。典型的骨質疏松癥的骨特點是，皮質骨薄，空隙增加，骨小梁稀疏，排列雜亂。引起骨質疏松癥的因素包括內分泌因素、營養因素、物理因素、免疫因素、遺傳因素等。其中女性絕經后骨質疏松癥主要由于雌激素缺乏導致松質骨骨量減少，加速骨重建，并引起骨骼結構脆化導致。因此，目前常用的骨質疏松癥研究模型是小鼠卵巢切除模型，小鼠卵巢切除后雌激素降低而引起骨質疏松。

多年來，雌激素是食品和藥品管理局推薦的預防和治療骨質疏松癥的唯一藥物，但是雌激素替代療法容易產生耐受并且具有較高副作用，可提高患中風和心肌梗死的風險。因此，需要進一步尋找有效抑制骨質疏松癥的藥物，為以后開發低副作用的治療骨質疏松癥藥物提供新的思路。化合物環氧二烯最早見于1999年的報道(Cai?et?al.，Tetrahedron?Letters，1999，40，1479-1482)，它從一株稀有真菌OS-F66617發酵液中分離得到，但文獻未報道其具有治療骨質疏松癥生理活性。

發明內容

本發明的目的在于提供環氧二烯作為破骨細胞分化抑制劑在制備治療骨質疏松癥藥物的應用，特別是作為治療雌激素缺乏引起的骨質疏松癥藥物的應用。

本發明所述環氧二烯的化學結構式如下：

環氧二烯的化學式為C₁₆H₁₈O₅，分子量為290.12。

本發明所述環氧二烯為化合物，可以來源于真菌發酵產物或化學合成。

經藥理實驗證實環氧二烯能在體內、外有效地抑制破骨細胞分化和骨量的丟失，本發明所述環氧二烯可作為破骨細胞分化抑制劑，并在制備治療骨質疏松癥藥物的應用，特別是作為治療雌激素缺乏引起的骨質疏松癥藥物的應用。

所述破骨細胞分化包括核因子κB受體活化因子配體(RANKL)誘導的破骨細胞分化，抗酒石酸性酸性磷酸酶(TRAP)、組織蛋白酶K(Cathepsin?K)和降鈣素受體(Calcitonin?Receptor)等破骨細胞分化特征基因以及破骨細胞關鍵整合因子活化T細胞核因子c1(NFATc1)。

附圖說明

圖1為MTT法檢測MED對小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞的細胞毒性。在圖1中，橫坐標為MED的濃度梯度(μmol/L)，縱坐標為560nm處的相對吸光度值OD₅₆₀；MTT法實驗結果表明，MED在濃度范圍(0.5～10μmol/L)之間對小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞不具有細胞毒性。

圖2為TRAP染色技術檢測MED對破骨細胞分化的影響。在圖2中，從左至右依次為Control，RANKL，R+MED(1μmol/L)，R+MED(2.5μmol/L)，R+MED(5μmol/L)；結果顯示，MED在2.5、5μmol/L濃度下對RANKL誘導小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞分化成破骨細胞具有抑制作用；以DMSO為空白對照組。

圖3為細胞計數檢測MED對破骨細胞分化的影響。在圖3中，橫坐標為MED的濃度梯度(μmol/L)，縱坐標為相對破骨細胞數量；通過對TRAP染色圖進行細胞計數顯示，MED在2.5、5μmol/L濃度下對RANKL誘導小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞分化成破骨細胞的數量具有明顯地抑制作用；以DMSO為空白對照組，其他濃度組分別與DMSO組進行t檢驗；*表示p＜0.05，**表示p＜0.01。

圖4為TRAP染色技術檢測MED在5μmol/L濃度下對破骨細胞分化形成階段的影響。在圖4中，從左至右依次為RANKL，0h，24h，68h，72h；結果顯示，MED與RANKL同時刺激小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞時可抑制破骨細胞分化，其他時間點無抑制作用；以DMSO為空白對照組。

圖5為細胞計數檢測MED對破骨細胞分化形成階段的影響。在圖5中，橫坐標為MED的加入時間(h)，縱坐標為相對破骨細胞數量；通過對TRAP染色圖進行細胞計數顯示，MED與RANKL同時刺激小鼠C57/BL6骨髓來源的巨噬細胞時可明顯地抑制破骨細胞的數量，其他時間點無抑制作用。以DMSO為空白對照組，其他時間組分別與DMSO組進行t檢驗；**表示p＜0.01。