[發明專利]一種用于腦神經保護的藥物的組合

有效

• 申請號: 201210016164.4
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102526021A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 李銘源;張在軍;李國輝
• 申請（專利權）人: 澳門大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P25/00;A61K31/192
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術領域

本發明涉及一種組合物，具體涉及一種用于保護腦神經的藥物組合。

背景技術

益智，別名益智仁、益智子，為姜科山姜屬植物，是中醫常用藥材。現代研究表明，益智具有拮抗鈣活性、強心、抗癌、控制回腸收縮及拮抗前列腺素的作用。授權公告號為CN100560718C的中國發明專利記載了益智乙醇提取物的主要成分原兒茶酸對氧化應激損傷的PC12細胞有保護作用，并能促進神經干細胞體外增殖及誘導其分化的作用。但迄今為止，尚未見國內外有對原兒茶酸和白楊素協同保護神經細胞損傷的作用的報導。

發明內容

本發明的目的在于提供一種組合物，該組合物具有保護腦神經的作用，可應用于保護腦神經藥物開發。

一種用于腦神經保護的藥物的組合物，含有：(a)原兒茶酸和(b)白楊素，(a)與(b)的摩爾比值為4～85∶1。

優選地，本發明的組合物對體外神經細胞損傷保護達到最佳效果時(a)與(b)的摩爾比值約80∶1。

優選地，本發明的組合物在斑馬魚體內神經保護達到最佳效果時(a)與(b)的摩爾比值約4∶1。

本發明的組合物，能在6-羥基多巴胺誘導的PC12細胞損傷模型中增強細胞活性、減少乳酸脫氫酶釋放；在6-羥基多巴胺誘發的斑馬魚體內模型中顯著減少多巴胺能神經元的損傷；同時(b)能增強(a)的神經保護作用。該組合物可應用于腦神經保護的藥物開發。

附圖說明

圖1為本發明的組合物對6-羥基多巴胺誘發的PC12細胞損傷的影響，其中，(A)為本發明的組合物對PC12細胞活性的影響，(B)為本發明的組合物對PC12細胞乳酸脫氫酶釋放量的影響；

圖2為本發明的組合物對6-羥基多巴胺誘發的斑馬魚多巴胺能神經元損傷的影響，(A)為代表性圖片顯示組合物能顯著阻止6-羥基多巴胺誘導的斑馬魚多巴胺能神經元數量減少；(B)為多巴胺神經元定量統計分析結果；

圖3為本發明的組合物增加了Nrf2/小時O-1的蛋白質表達，其中，(A)為本發明的組合物12小時內時間依賴地上調了Nrf2/HO-1的蛋白質表達，(B)顯示Nrf2/HO-1被組合物誘導的蛋白質表達變化具有濃度依賴性；

圖4為本發明的組合物誘導了Nrf2向細胞核轉移，并增強了其轉錄活性，其中，(A)為本發明的組合物顯著降低細胞質中Nrf2含量并提高細胞核中Nrf2含量，6-羥基多巴胺單獨處理組亦提高Nrf2在細胞核中的表達，(B)顯示白楊素、原兒茶酸和白楊素組合可提高Nrf2的轉錄活性；

圖5為Nrf2?siRNA下調了PC12細胞的Nrf2/HO-1的蛋白質表達，并抑制了本發明的組合物的細胞保護作用，(A)顯示Nrf2?siRNA顯著降低Nrf2的蛋白質表達，以及Nrf2所調節的關鍵轉錄蛋白質HO-1的下游信號通路，(B)顯示Nrf2?siRNA能特異性抑制本發明組合物在6羥基多巴誘導PC12細胞損傷的保護作用，但Nrf2?siRNA和陰性對照RNA轉染本身并未影響PC12的細胞活性。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例子對本發明作進一步詳細介紹。

實施例1?PC12細胞的培養

PC12神經細胞為購自美國模式培養物保藏所(ATCC)的大鼠嗜鉻細胞瘤細胞。培養基為F-12K基礎培養基，含15％(體積百分比)的熱滅活馬血清、2.5％(體積百分比)的胎牛血清、青霉素(100單位/毫升)和鏈霉素(100微克/毫升)，細胞培養置于含95％濕度和5％CO₂的37℃的培養箱中，培養基隔天更換一次。

實施例2本發明的組合物對6-羥基多巴胺誘發的PC12細胞損傷的保護作用

1.實驗設計及藥物處理

原兒茶酸和白楊素分別溶解于二甲基亞砜(DMSO，購自西格瑪奧德里奇公司)中，儲存液濃度為500mmol/L和12mmol/L，使用時直接稀釋于培養基中，DMSO終濃度不超過0.3％。用系列稀釋的原兒茶酸或白楊素，或它們的組合物預處理細胞12小時，然后更換含1mmol/L的6-羥基多巴胺新鮮低血清培養基處理8小時誘導PC12細胞損傷，用MTT和乳酸脫氫酶釋放法檢測細胞活力。

2.PC12細胞損傷的檢測方法

(1)MTT法