[發明專利]一種新型連接酶反應介導的擴增方法及用途

有效

• 申請號: 201210015431.6
• 申請日: 2012-01-18
• 公開（公告）號: CN102559661A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 王小波
• 申請（專利權）人: 廈門基科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門市誠得知識產權代理事務所 35209
• 代理人: 方惠春

1.一種連接酶反應介導的擴增方法，采用連接探針a、b、c介導擴增，其特征在于：每條連接探針由特異雜交序列及填入的標簽序列組成，具體為：目標序列7從3’端到5’端分別分為A段，B段，C段和D段，連接探針a為A段的反向互補序列2加上一段上游引物標簽序列1組成，即2－1；?連接探針b為C段的反向互補序列3’，加上B段和C段之間的檢測標簽序列4和B段的反向互補序列3組成，即3’-4-3；?連接探針c為一段下游引物結合標簽序列6加上D段的反向互補序列5組成，即6－5；所述的序列1、4、6為不與目標序列雜交的序列。

2.權利要求1的連接酶反應介導的擴增方法，其特征在于：所述的上游引物標簽序列1、下游引物結合標簽序列6和檢測標簽序列4的設計原則分別為：GC含量適中，Tm值為55-70℃，長度為18-35nt，與目標基因組無較高同源性。

3.權利要求1的連接酶反應介導的擴增方法，其特征在于：所述的序列2、3、3’、5為?GC含量適中，Tm值為50-70℃，與目標序列特異雜交。

4.權利要求1的連接酶反應介導的擴增方法，其特征在于：所述的連接探針a、b和c的序列中除去序列1、4、6外均為特異雜交序列。

5.一個試劑盒，包含權利要求1－4中任一項所述的連接探針a、b和c。

6.一種芯片，包含權利要求1－4中任一項所述的連接探針a、b和c。

7.權利要求1的連接酶反應介導的擴增方法及權利要求5的試劑盒和權利要求6的芯片的用途。

8.權利要求7的用途是指在進行基因序列分型、定量等檢測中的用途。

9.一種連接酶反應介導的擴增方法所用連接探針a、b和c的制備方法，其步驟為，選定模板的目標序列7，將其從3’端到5’端分別分為相互不間隔的A、B、C、D段，A的反向互補序列為序列2，B的反向互補序列為序列3，C的反向互補序列為序列3’，D的反向互補序列為序列5，其中連接探針a即為序列2加上序列1，連接探針b為序列3加上序列4加上序列3’，連接探針c為序列6加上序列5，其中序列1、4、6為GC含量適中，Tm值為55-70℃，長度為18-35bp，與目標基因組無較高同源性的序列；其中的序列2、3、3’、5的GC含量適中，Tm值為50-70℃，按照連接探針a、b、c的序列，化學合成即可。