[發明專利]一種天然抗氧化肽Rotodorin-D1及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210014119.5
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102584950A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 梁醒財
• 申請（專利權）人: 梁醒財
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/16;A61K8/64;A61Q19/08
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司 53100
• 代理人: 金耀生

1.一種天然抗氧化肽Rotodorin-D1，其特征在于天然抗氧化肽Rotodorin-D1，其為基因編碼產物，N端到C端的序列：KSSDVKYYLAKCTTDVQ。

2.權利要求1所述的天然抗氧化肽Rotodorin-D1的制備方法，其特征在于按以下步驟進行：

①皮膚分泌物的獲取：用6V的電壓刺激云南臭蛙的皮膚6s，之后以25mM?Tris-HCl緩沖液pH＝7.8清洗臭蛙的身體，收集皮膚分泌物，將收集到的分泌物于4000rpm離心15min，將上清液真空冷凍干燥，并儲存于-80℃備用；

②多肽的純化：將凍干的上清液樣品重新溶解，上預先用25mM?Tris-HCl緩沖液pH＝7.8，含有0.1M?NaCl平衡好的Sephadex?G-75凝膠過濾柱，以0.3ml/min的流速進行洗脫，每10min收集一次洗脫液；洗脫液用280nm監測，繪制分離純化圖譜，收集到抗氧化活性成分，并用C₄柱除去里面的鹽分后冷凍真空干燥后，用20mM的NaAc-HAc緩沖液pH＝4.0溶解樣品，用相同緩沖液平衡好的Resource?S分離柱進行純化，利用含有1M?NaCl的同一緩沖液、以1ml/min的流速進行洗脫，洗脫液用215nm波長進行監測，收集到具有抗氧化活性的成分后，用含0.1％v/vTFA的超純水平衡好的HPLC?C18分離柱進行分離，利用含有0.1％v/vTFA的乙腈以0.7ml/min的流速洗脫，洗脫液在215nm下進行監測，最終獲取天然抗氧化肽Rotodorin-D1純品。

3.根據權利要求2所述的天然抗氧化肽Rotodorin-D1的制備方法，其特征在于抗氧化活性評估具體如下：首先配置ABTS儲存液：在水溶液溶解2.8mM過硫酸鉀和7mM?ABTS，避光反應至少6小時，之后，立即用水稀釋125倍，50微升溶于水的樣品加入50微升ABTS稀釋液，避光反應至少10分鐘，之后，在415nm波長下讀其吸光度，樣品抗氧化活性用如下公式進行計算：(A_blank-A_sample)×100/A_blank。

4.權利要求1所述的天然抗氧化肽Rotodorin-D1的應用，其特征在于將抗氧化活性的多肽Rotodorin-D1應用于化妝品的制備中，將天然抗氧化肽直接投入到化妝品的配方中。